Un método simple para monitorear la concentración de dimetilsulfóxido en protocolos de criopreservación. Aplicación en hepatocitos aislados de rata

TOMATIS C.; JUAN DE PAZ L.; OSORIO J.S.; CARNEVALE M.E.; ROBERT M.C.; GUIBERT E.E.; RODRIGUEZ J.V.

João Pessoa

Congreso; X Congresso Latino Americano de Orgãos Artificiais e Biomateriais (10° COLAOB); 2018

Sociedade Latino Americana de Biomateriais e Órgãos Artificiais

Durante el proceso de criopreservación de suspensionescelulares resulta crítica la remoción del agente crioprotector (ACP). Hay unavelocidad óptima de remoción para evitar el estrés osmótico debido a lasdiferentes permeabilidades de la membrana al agua y al ACP a la temperatura detrabajo. Una opción es realizar el proceso en etapas progresivas para minimizarlos cambios de volumen celular y el posible daño asociado. La evolución de la concentracióndel ACP en el medio de suspensión celular refleja la concentración intracelulardel mismo. Los métodos estándar para dicho monitoreo son: estimación de la osmolalidaddel medio (OSM) y de la concentración del ACP por HPLC o  espectroscopía de Fourier. En este trabajo proponemosutilizar el índice de refracción (IR) como indicador de la concentración delACP durante el proceso de agregado y remoción del mismo. Para ello hepatocitos derata fueron criopreservados en Bes-Gluconato-Polietilenglicol Cold Storage(BGP-CS) - 10 % DMSO, almacenados a -196 °C y posteriormente descongelados. ElACP se diluyó en 5 etapas sucesivas con BGP-CS y se resuspendieron en BGP-CS a4 °C. En cada una de las etapas se determinó la concentración  de DMSO ([DMSO]) por IR (refractómetro ATAGOPAL-RI), HPLC y OSM (descenso crioscópico). Previamente se realizaron lascurvas de calibración para IR, HPLC y OSM con concentraciones crecientes deDMSO en BGP-CS (0 a 40 %). Se pudo determinar por refractometría que la [DMSO] inicial fue de 10.07 ± 1.86 % mientras que en la resuspensión final fue de0.32 ±  0.27 % (n=3). Losresultados mostraron una muy buena correlación estadística del IR con las metodologías comúnmenteutilizadas. En conclusión el método refractométricoes una alternativa rápida, simple y económica para controlar la calidad de las preparacionesde las soluciones y evaluar la [DMSO] duranteprocedimiento de criopreservación de células.