Expresión folicular de segundos mensajeros de la hormona del crecimiento en vacas con Enfermedad Quística Ovárica.

LEIVA, C.J.M.; DURANTE, L.I.; BELOTTI, E.M.; DÍAZ, P.U.; MATILLER, V.; SALVETTI, N.R.; ORTEGA, H.H.; MARELLI, B.E.

Esperanza, Santa Fe

Jornada; VIII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2020

Facultada Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

Lahormona del crecimiento (GH) es producida principalmente por la adenohipófisis,estimula la liberación del factor de crecimiento análogo a insulina (IGF-I) enel hígado y es clave para el control y distribución de los nutrientes2.GH también es el regulador postnatal del crecimiento y del metabolismo en losmamíferos. Juega un rol crítico en el control de la lactancia, en el proceso dedesarrollo y crecimiento de la glándula mamaria y en la fertilidad en elbovino. En diferentes especies se ha demostrado que la GH puede actuarselectivamente sobre los folículos ováricos, inhibiendo el crecimiento delfolículo preovulatorio y estimulando el desarrollo de folículos subordinados.La función ovárica en el bovino está controlada por mecanismos deretroalimentación locales y sistémicos que aseguran que en más del 96% de losciclos estrales sólo ovule un folículo. Diferentes estímulos sistémicos comolas gonadotrofinas, la GH, el IGF-I y la insulina influyen en el crecimientofolicular 4, y factores producidos localmente, como IGF-I einhibina, también tienen un rol modulador fundamental. La alteración odisrupción de la sincronía entre estos actores podría contribuir a la patogeniade enfermedades reproductivas, como la enfermedad quística ovárica (EQO) o lapersistencia de folículos anovulatorios, las cuales comprometen la eficienciade los rodeos lecheros. Los efectos somatotróficos y metabólicos de GH estánmediados por el receptor de GHR localizado en la membrana celular. El mecanismode señalización intracelular de dicho receptor depende, principalmente, de laactivación de dos familias de proteínas intracelulares: las JAKs (Januskinasas) y las STATs (signal transducers and activators transcription), por loque se lo conoce como la vía JAK-STAT1. Las JAKs están asociadas aldomino intracelular del receptor de modo que, luego de la unión de GH, estasproteínas son activadas por transactivación y luego fosforilan a las STATs. LasSTATs fosforiladas translocan al núcleo donde se unen a elementos de respuestaespecíficos. Considerando lo anteriormente expuesto nos planteamos comoobjetivo del presente trabajo caracterizar posibles alteraciones en elmecanismo de señalización de la GH asociados a la EQO. Para ello nos propusimosevaluar la expresión proteica de STAT3, en las diferentes categoríasfoliculares de ovarios de bovinos sanos sincronizados y en ovarios de animales conEQO. En esta experiencia se utilizaron vacas de la raza Holando Argentino. Losovarios controles fueron obtenidos de animales (n=5) cuyos ciclos estralesfueron sincronizados mediante el protocolo G6G - Ovsynch. Además, se obtuvieronovarios de vacas con EQO espontánea (n=9). Las muestras fueron obtenidasmediante ovariectomía bilateral dos días después de finalizada lasincronización (proestro) para los controles y en el momento del diagnósticopara EQO. Los ovarios se fijaron en formol bufferado y procesaron mediantetécnicas histológicas de rutina3. Los cortes histológicos fueronanalizados utilizando la técnica de inmunohistoquímica indirecta con un anticuerpocomercial anti-STAT3 total (Abcam / ab32143) 1:300. Para el revelado se utilizóel sistema CytScanTM Biotinyloted Link (Cell Marque). Las imágenesmicroscópicas de folículos ováricos de distintas categorías fuerondigitalizadas y analizadas utilizando el sistema Image-Pro Plus 3.0.1.determinando el porcentaje (%) de área inmunopositiva, tanto en células de lagranulosa como de la teca. Los valores obtenidos se analizaron mediante el softwareSPSS 10.1 utilizando el test de ANOVA seguido del test de Duncan paracomparaciones múltiples. Como resultado podemos mencionar que fue posibledetectar la inmunoexpresión proteica de STAT3 total tanto en la teca como en lagranulosa de todas las categorías foliculares analizadas: primordial,primarios, preantral pequeño, preantral grande, antral, atrésico y quiste. Además,en el grupo EQO se evidenció una disminución de su expresión en células de lagranulosa en folículos antrales, quistes y atrésicos comparados con losestadios iniciales de la foliculogénesis (p<0,05). Dicha diferencia no seobservó en células de teca. En el grupo control encontramos diferencias en lainmunoexpresión en células de la teca entre las diferentes categoríasfoliculares (p<0,05 Muchos de los eventos de señalización mediados por cascadasde fosforilación descritos anteriormente para GH generan cambios en laexpresión de determinados genes en las células diana. La GH regula la actividadde los factores de transcripción, STATs, y éstos modifican la expresión de losgenes específicos en la célula diana, que probablemente medien sus funcionesfisiológicas a largo plazo. La activación de la vía GH / JAK / STAT3 mediante fosforilación,da como resultado la expresión de genes regulados por STAT3 involucrados en elcrecimiento celular, la supervivencia y diferenciación celular. Considerando que STAT3 es considerado un intermediarioimportante en la acción de GH, nos permite pensar que la disminución en suexpresión en células de la granulosa en folículos antrales, atrésicos y quistesdel grupo EQO podría ser un factor asociado al desarrollo de la enfermedad.