Desarrollo de un conjugado inmunogénico a partir de polisacáridos capsulares de Staphylococcus aureus.

BARBAGELATA M. S.; MARELLI B.; MARCIPAR I

La Plata, Buenos Aires

Congreso; XI Jornadas de Jóvenes Investigadores de la Asociación de Universidades del Grupo Montevideo. 1ª Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional de La Plata.; 2003

AUGM

El Staphylococcus aureus es la principal causa de mastitis en vacas, resultando en grandes perdidas económicas. Existen evidencias de la presencia de una cápsula de polisacáridos que actúa como factor de virulencia y como antígeno protectivo del S. aureus, esta cápsula permite el acceso de anticuerpos a la pared celular pero enmascara el reconocimiento de anticuerpos por PMN. Los polisacáridos capsulares son antígenos T-independientes muy pocos inmunogénicos, incapaces de estimular una memoria inmunológica. La conjugación de los polisacáridos  capsulares con una proteína portadora conduce al aumento de la inmunogenicidad de los mismos. En el presente trabajo se propuso desarrollar y caracterizar un conjugado inmunogénico constituido por exopolisacáridos purificados a partir de las cepas de S. aureus aisladas de muestras de leche proveniente de animales con mastitis en la región, utilizando como portadora una proteína recombinante de Trypanosoma cruzi TcP2bNt-TcCCt de 31 kDa, altamente inmunogénica y no relacionada serologicamente con el S. aureus. Para ello se aislaron cepas de S. aureus por métodos convencionales de microbiología, se extrajeron los exopolisacáridos por tratamiento alcalino con NaOH 0.1 N durante 2 horas, neutralización del pH con HCl 1 N y se purificaron por tamiz molecular utilizando membranas de ultrafiltración. Se procedió a la conjugación de los exopolisacáridos con TcP2bNt-TcCCt, obtenida por inducción de una cepa de E. coli transformada, sonicado y posterior purificación por columna de pseudoafinidad a Níquel. Se conjugaron por el método de Wilson y Nakane, por oxidación de los polisacáridos con peryodato, unión con los grupos amino del TcP2bNt-TcCCt y estabilización por reducción con borohidruro. El conjugado obtenido se purificó por PAGE preparativo y posterior elución del gel con una solución Tris-ClH 0.1 M, pH=8, SDS 0.1%. El producto purificado se evaluó por PAGE con tinción por plata para identificar la diferencia de peso molecular del conjugado respecto a los componentes originales y por Western Blot para evaluar la presencia de ambos componentes en el producto purificado: incubando con un suero de conejo anti - TcP2bNt-TcCCt, revelado con diaminobencidina para verificar la presencia de la proteína portadora y mediante una incubación con Con A, revelado con peroxidasa para verificar la presencia del polisacárido en el material obtenido y purificado, observándose la obtención del conjugado inmunogénico con un peso molecular de 120 kDa.