Evaluación de promotores destinados a la expresión de proteínas heterólogas en Lactococcus lactis.

MARELLI, BELKIS; GUILLERMO, REPIZO; DIEGO DE MENDOZA; CHRISTIAN MAGNI

La Plata, Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Microbiología General; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología General

Las bacterias ácido lácticas (LAB) son utilizadas en la industria para la producción de alimentos fermentados. Por otro lado, el avance del conocimiento biotecnológico ha permitido vislumbrar el desarrollo de alimentos con propiedades terapéuticas mediante la incorporación de LAB que expresan una proteína particular (alimentos funcionales). Actualmente, un gran número de proteínas heterólogas son expresadas en LAB. Entre ellas podemos mencionar antígenos virales o bacterianos destinados a la producción de vacunas, así como hormonas y diversas enzimas. Con el objeto de desarrollar un sistema eficaz de expresión de proteínas heterólogas en L. lactis se evaluaron diferentes promotores inducibles por la acidificación del medio, así como promotores inducibles por temperatura o NaCl. En cuanto a los promotores inducibles por pH trabajamos con el promotor del operon cit (PcitM), y los promotores Pals, PaldB, PaldC, PbutB. Además, evaluamos el promotor del gen dnaK (PdnaK) inducible por temperatura y el promotor del operón que codifica para el transportador de betaína (PbusA) inducible por NaCl. Para comparar la actividad de dichos promotores se utilizó el vector pAK80 el cual permite hacer fusiones transcripcionales al gen reportero lacLM en L. lactis. A continuación se evaluó la actividad b-galactosidasa de los cultivos de LAB transformadas con cada una de las construcciones en las diferentes condiciones de crecimiento requeridas para cada promotor. Los resultados de estos ensayos demostraron que el PcitM  posee la actividad mayor con una tasa de inducción de 3,5 veces por unidad de pH. Por este motivo, en un paso posterior, se evaluó este promotor en la capacidad de dirigir la expresión de una proteína de interés. Aquí se utilizó el gen codificante para el antígeno de rotavirus VP8. Tendientes a expresar la proteína viral VP8 se realizaron experimentos en cultivos cerrados y en fermentadores a diferentes pHs. El análisis de expresión de VP8 por la técnica de Western blot nos permitió comprobar su sobrexpresión en condiciones acídicas.