Preparación de inmunógenos polisacarídicos de cepas de Staphylococcus aureus responsables de mastitis bovina en la región Litoral

MARELLI B.; BARBAGELATA M. S.; MARCIPAR I.

La Plata, Buenos Aires

Congreso; XI Jornadas de Jóvenes Investigadores de la Asociación de Universidades del Grupo Montevideo. 1ª Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional de La Plata.; 2003

AUGM

La mastitis bovina es la enfermedad infecciosa más importante de las vacas lecheras que afecta la cantidad y la calidad de la leche producida. En Argentina, las pérdidas causadas por esta enfermedad en la producción de leche alcanzan los $ 221 millones anuales. El Staphylococcus aureus (S. aureus) es el agente etiológico más importante de mastitis bovina. El desarrollo de una vacuna será de gran importancia para el control de esta patología. La fagocitosis por neutrófilos polimorfonucleares (PMN) es el mecanismo de defensa más efectivo de la glándula mamaria contra la infección por este microorganismo. Sin embargo, el 94-100% de los S. aureus  desarrollan in vivo una capa de exopolisacáridos (cápsula) que si bien no impide la unión de los anticuerpos y del complemento (opsoninas) a la pared celular, enmascara el reconocimiento de éstos por los receptores situados en la superficie de los neutrófilos PMN. Por tal motivo este trabajo se centró en la obtención de anticuerpos específicos para la cápsula que promueven la opsonización y fagocitosis eficientes de los estafilococos encapsulados. Dado que los exopolisacáridos son poco inmunogénicos se requiere un adyuvante para la producción de anticuerpos contra la cápsula. En la actualidad se ha comprobado que los liposomas actúan como adyuvantes efectivos en preparaciones con antígenos purificados. Los objetivos de este trabajo consistieron en desarrollar una tecnología para la preparación de exopolisacáridos de S. aureus incluídos en liposomas y evaluar su inmunogenicidad en modelos de animales. Para ello se aislaron cepas de S. aureus por métodos convencionales de microbiología. Se extrajeron los exopolisacáridos por tratamiento térmico según procedimiento de Fournier y se purificaron por tamiz molecular utilizando membranas de ultrafiltración. Se incluyeron los exopolisacáridos dentro de liposomas según técnica de Amorena y col. y se evaluó la respuesta inmune desarrollada en modelos de animales de experimentación siguiendo la producción de anticuerpos por la técnica ELISA. Como resultado del trabajo se obtuvo una fracción de exopolisacáridos de PM entre 10-20 kDa. Esta fracción fue incluída en una preparación de liposomas y evaluada frente a controles en ratones Swiss inoculados con 1 y 10 mg de exopolisacáridos y controles sin liposomas y con liposomas vacíos. El polisacárido en presencia de liposoma desarrolló una respuesta específica de anticuerpos significativamente mayor (P<0.05) que los controles cuando se suministraron dosis de 10 mg pero no sucedió así con la dosis de 1 mg.