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Existe una demanda de sistemas de expresión que permitan la producción de proteínas heterólogas de interés en el campo de la alimentación y la salud. Entre los sistemas de expresión conocidos, Lactococcus lactis posee ventajas sobre otros ya que es una bacteria no patógena consumida por el hombre en los alimentos. Además, cabe destacar que esta bacteria puede expresar, transportar y liberar proteínas en el tracto gastrointestinal siendo potencialmente útil para el desarrollo de vacunas orales y nuevos alimentos con propiedades terapéuticas. Para este tipo de aplicaciones es necesario disponer de vectores de expresión de fácil manipulación y bajo costo de aplicación. Con la intención de construir un vector con estas características, en primer lugar se evaluaron las actividades transcripcionales de diferentes regiones promotoras utilizando fusiones al gen reportero de la b-galactosidasa. De esta manera se seleccionó el promotor Pcit de L. lactis CRL264 por su mayor actividad transcripcional. Este promotor, inducible por pH ácido, regula la expresión del operón citMICDEFXG involucrado en el metabolismo de citrato. Además, en el vector se incluyó la región de replicación del plásmido pCIT264 que porta el gen de la citrato permeasa de la cepa de L. lactis CRL264 y un gen de resistencia a cloramfenicol. De esta manera se obtuvo el vector pBM2. Los niveles de expresión obtenidos mediante pBM2 se compararon usando como referencia el vector pNZ8048, un miembro de la familia de vectores del sistema de expresión NICE (NIsin-Controlled gene Expression system) muy utilizado en la expresión de proteínas heterólogas en L. lactis. Para dichos ensayos se utilizó una proteína de alto interés económico y social como es la subunidad VP8* de la proteína VP4 de la cápside de rotavirus. Se evaluó su producción en las formas citoplasmática y secretada al medio exterior. Para este último caso, se utilizó el péptido señal de la proteína Usp45 de L. lactis MG1363. Utilizando el sistema NICE pudimos expresar en L. lactis la proteína VP8* en las formas citoplasmática y secretada siendo los niveles de expresión proporcionales a la concentración del inductor (0-50 ng/ml de nisina). Por otro lado, utilizando el sistema inducible por pH (pBM2) obtuvimos VP8* en la forma secretada pero no así en la forma citoplasmática. Debido a que nuestro sistema presentó menores niveles de expresión que el sistema NICE estamos evaluando la posibilidad de incrementar su actividad transcripcional mediante modificaciones en la región promotora Pcit.

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