Desarrollo y validación de un ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos generados por un candidato vacunal para COVID-19 basado en una mezcla de proteínas “Spike” triméricas recombinantes relacionadas a tres variantes de SARS-CoV-2.

B. MARELLI; SANTIAGO G; DIAZ PU; ORTEGA H

Buenos Aires

Congreso; LIV Reunión Anual de la ASOCIACIÓN ARGENTINA DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL (AAFE).; 2022

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL (AAFE).

Los inmunoensayos son métodos analíticos basados en anticuerpos para el análisiscuantitativo/cualitativo de diferentes moléculas, y utilizados para diagnóstico, estudiosfarmacocinéticos y farmacodinámicos. Son ensayos seguros, con alta especificidad, sensibilidad y eficiencia. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un ELISA indirecto bajo BPL para evaluar la respuesta inmune humoral generada por un candidato vacunal trivalente, como parte de la evaluación preclínica del mismo para registro ante ANVISA. El candidato vacunal consistió en una mezcla equimásica de proteínas Spike triméricas recombinantes de las variantes D614G, Delta y Gamma de SARS-CoV-2, en una mezcla de adyuvantes y excipientes (formulación confidencial). Las muestras de suero analizadas provinieron de un estudio realizado en conejos neozelandeses (n=8/grupo). Los animales recibieron 3 dosis del candidato vacunal (mezcla de 30 g de cada variante antigénica) en los días 0, 14 y 28. Muestras de suero fueron obtenidas a los días 0, 14, 30 y 42. Como control de activo se utilizó la solución de adyuvantes y excipientes y como control basal, PBS 1X. Un suero hiperinmune de conejo inoculado con la mezcla antigénica fue utilizado como control positivo. La respuesta inmune humoral generada por cada variante antigénica fue evaluada mediante ELISAs indirectos diseñados y validados para tal fin.Los resultados fueron expresados como el promedio de las sumatorias de las DO (450-650 nm)de las diluciones de suero evaluadas de todos los animales de un mismo grupo para cada tiempo; y como el % de reactividad de los sueros en relación al control positivo. Así se pudo determinar que la respuesta inmune generada por el candidato vacunal fue significativa respecto a los grupos controles (p<0.05) hasta el final del ensayo. Los datos obtenidos fueron aceptados por la agencia regulatoria ANVISA, demostrando la importancia del desarrollo de ensayos bajo BPL para el registro de nuevos fármacos en diferentes países.