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El control de losprocesos reproductivos implica la integración de una serie de factores talescomo el estado gonadal, la condición corporal, el estrés, el estado metabólico y,en algunas especies animales, la estación/fotoperíodo. En los mamíferos, losfactores reguladores de los ciclos reproductivos se originan y/o se integranprincipalmente al eje gonadotrópico. La función de este sistema neurohormonalse basa en la interacción dinámica de tres grupos principales de señales que provienendesde el hipotálamo, con la producción y secreción de la hormona liberadora degonadotropinas (GnRH); la hipófisis anterior que secreta las gonadotropinashormona luteinizante (LH) y hormona foliculoestimulante (FSH); y las gónadas,que además de producir gametos, son responsables de la síntesis y secreción dehormonas esteroides sexuales2. La kisspeptina (Kiss), un neuropéptidoidentificado en los últimos años, también participa en diferentes aspectos relevantesde la reproducción, incluidos la maduración y función reproductiva, el iniciode la pubertad hasta la edad adulta, el control metabólico de la fertilidad y elestablecimiento de la preñez. Una de las funciones principales de Kiss es la estimulacióndel eje hipotálamo-hipófisis-gonadal a través de su acción directa sobre lasneuronas hipotalámicas liberadoras de GnRH (Smith et al., 2006). Estudios invitro en porcinos han demostrado que, además de su acción a nivel central,Kiss tiene un efecto modulador sobre la producción de progesterona, el sistemade defensa antioxidante y la angiogénesis ovárica. En adición, en gatosdomésticos se ha observado que Kiss modula la función de ovocitos, laesteroidogénesis y la remodelación ovárica. En bovinos, la informacióndisponible sobre la producción ovárica de Kiss y su influencia sobre lareproducción es escasa hasta el momento. Por ello, planteamos como objetivo delpresente trabajo analizar la producción local de Kiss y su receptor (KissR) enovarios bovinos, así como las concentraciones séricas e intrafoliculares dedicha hormona durante el periodo de reanudación de laactividad ovárica posparto y su posible relación con el restablecimiento de laactividad ovárica normal.Para el estudiose utilizaron vacas multíparas de la raza Holando Argentino pertenecientes a unestablecimiento lechero de la localidad de Hipatia. Todos los procedimientos enanimales fueron aprobados por el Comité Asesor de Ética y Seguridad de la FCV. Losanimales seleccionados (n=37) presentaron un estado sanitario y reproductivoóptimo a lo largo de todo el estudio. El ciclo estral de los mismos fueanalizado mediante ultrasonografía utilizando un ecógrafo Mindray Z6 Vet. Elseguimiento de los animales se inició a partir de los 7 ± 2 días postparto(DPP; inicio de la primera onda folicular) y se continuó cada 3 ± 1 días, a finde detectar la emergencia de la onda folicular y el establecimiento de la dominancia.Cuando un único folículo alcanzó un tamaño ≥ 10 mm (folículo dominante) seprocedió a la primera toma de muestra mediante aspiración folicular. Posteriormente,los mismos animales fueron reexaminados al día 45 posparto, antes de laliberación a servicio. Previo al segundo examen, los animales fueron sometidosa un protocolo sincronización de celos ?OvSynch? con dispositivo intravaginal(DIV) de progesterona. Al día 0 se les administró 2.5 ml de GnRH (GONAXAL®,Biogénesis Bagó) y se les colocó un DIV de progesterona (Crestar®IVGIntravaginal 1.3 g, MSD). Al día 7 se les retiró el DIV y se les administró 2ml de Prostaglandina F2α (Estrumate®, MSD). Finalmente, al día 9 se realizóultrasonografía para evaluar las estructuras ováricas y se realizó la segundatoma de muestra mediante la aspiración del folículo preovulatorio. Para elprocedimiento de aspiración folicular se utilizó un sistema de ultrasonidodigital Chison 8300 Vet equipado con un transductor microconvexo de 5,0 MHzmontado en una sonda transvaginal para aspiración folicular(Watanabe Tecnología Aplicada Ltda., Brasil). El líquido folicular (LF) obtenidofue centrifugado a 2000g durante 10 min a 4°C para separar las células de lagranulosa (CG). En ambos puntos de muestreo también se tomaron muestras desangre por venopunción coccígea, las cuales fueron procesadas para la obtenciónde suero. El LF y el suero fueron alicuotados y almacenados a -80°C para las determinacioneshormonales. Las CG fueron conservadas a -80 para la extracción de ARN yproteínas. La expresión génica de Kiss y su receptor fue evaluada mediante PCR realtime utilizando el sistema Light Cycler Detection System y el coloranteSYBR Green I (Invitrogen). La expresión proteica de KissR fue analizadamediante geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE al12% (p/v)) y posterior electrotransferencia a membranas de nitrocelulosa (GEHealthcare). Para la detección de KissR se utilizó el anticuerpo primario KissR(PA5-33878, Invitrogen). Los niveles intrafoliculares y séricos de kisspeptinafueron evaluados mediante ELISA indirecto empleando un kit comercial (BovineKiss ELISA Kit, FineTest). Para elanálisis de los resultados de expresión génica y concentración de Kiss, losanimales fueron agrupados según el tiempo de aparición del primer folículodominante luego del parto en vacas con menos días posparto (MeDPP ≤ 11; n=15) omás días de posparto (MaPPD > 11; n=22). Los resultados fueron analizadosmediante un Modelo Mixto Lineal Generalizado (MMLG) con distribución gamma, alcual se asignaron los días postparto (PPD), tiempo de muestreo (T) y PPD x Tcomo efectos fijos y vacas como efecto aleatorio. Por otro lado, para elanálisis de los resultados de expresión proteica, se usó el modelo de Mann-Whitney parados muestras independientes, que analiza el primer folículo dominante pospartorespecto al folículo preovulatorio. Los resultados obtenidos muestran una baja expresión génica de Kiss y sureceptor en CG durante el periodo de posparto analizado. Los niveles de ARNm detectadosse encontraban por fuera del rango dinámico de cuantificación en ambos casos y,por lo tanto, no se pudo realizar la cuantificación relativa de los mismos. Porotra parte, mediante ensayos de western blot se observó una banda proteicaúnica con un peso molecular aproximado de 45kDa correspondiente a KissR. Noobstante, no se evidenciaron diferencias significativas en la expresiónproteica de KissR en CG, sin encontrar diferencias significativas entre elprimer folículo dominante posparto y el folículo preovulatorio. Por último, mientraslas concentraciones sistémicas de Kiss fueron similares entre los gruposanalizados (P>0.05), las concentraciones foliculares fueron mayores enel primer folículo dominante postparto respecto al folículo preovulatorio (P<0.05). En adición,hubo una interacción entre DPP y T debido a la mayor concentración intrafolicularen el primer folículo dominante posparto respecto al folículo preovulatorio enel grupo MaDPP (P<0.05). El presente trabajo pone en evidencia la producción local de Kiss y sureceptor en el ovario bovino durante el periodo posparto, la cual podría actuara través de mecanismos autócrinos o parácrinos dentro del propio ovario. Lamayor concentración intrafolicularen el primer folículo dominante posparto respecto al folículo preovulatorio podríaestar asociado con la producción de estrógeno intrafolicular3 o conla mayor producción local de kisspeptina1al momento de la emergencia de la primera onda folicular posparto. El sistemaKiss-KissR en el ovario podría modular la fisiología ovárica participando en lafoliculogénesis o esteroidogénesis impactando positivamente en el reinicio dela ciclicidad ovárica posparto luego del anestro gestacional. Nuevos estudios seránnecesarios para profundizar el conocimiento sobre el rol fisiológico de Kiss enla funcionalidad ovárica y su relación con la ciclicidad posparto.

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