Método económico de genotipificación por fluorescencia de SSR en Anadenanthera colubrina var. cebil

GONCALVES, A.L.; M.E. BARRANDEGUY; M.V. GARCÍA

Salta

Congreso; XLII Congreso Argentino de Genética, III Reunión Regional SAG - NOA; 2013

Sociedad Argentina de Genética

La genotipificación empleando microsatélites (SSRs) se realiza, generalmente, mediante electroforesis capilar y un sistema de detección láser. Para ello, uno de los cebadores de cada locus debe llevar una marca fluorescente. Dado que incorporar una marca fluorescente por cada par de cebadores es costoso, se ensayó el método propuesto por Schuelke (2000) en el cual se emplea un único cebador universal marcado con fluorescencia. Se genotipificaron 10 individuos de Anadenanthera colubrina var. cebil (Leguminoseae) mediante cuatro loci SSRnu específicos aplicando los dos métodos, es decir: empleando una marca fluorescente por cada par de cebadores SSRs específicos y empleando el método de Schuelke (2000). En este último se empleó el cebador universal M13 marcado con el fluoróforo FAM en su extremo 5?. Al extremo 5? de los cebadores SSRs forward se incorporó el cebador M13 y se utilizaron los cebadores reverse originales. Estos cebadores se utilizaron en una proporción 0,3:0,4:1, respectivamente. Se requieren temperaturas diferentes de hibridación para el cebador universal marcado y para los cebadores SSRs específicos para asegurar el éxito de este método. Ambos métodos permitieron genotipificar a los individuos de manera eficaz aunque el método de Schuelke resulta más eficiente ya que el empleo de un único cebador marcado para genotipificar múltiples loci reduce los costos de manera proporcional al número de regiones analizadas.