Purificación y evaluación de la actividad antimicrobiana de un compuesto producido por Lecanicillium sp. LY 72.14.

DANILOVICH, MARIANA; PERALTA, PATRICIA; FARIÑA, JULIA; DELGADO, OSVALDO

Lima, Peru

Congreso; IX CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICOLOGÍA; 2017

Resumen del trabajoLos antimicrobianos son ampliamente utilizados para diversas aplicaciones que van desde bioconservantes y aditivos cosméticos hasta antibióticos empleados para el tratamiento eficaz de enfermedades infecciosas. La creciente resistencia de los microoganismos patógenos frente a los antibióticos convencionales ha fomentado la búsqueda de nuevos antimicrobianos. Frente a este escenario, los programas de bioprospección que involucran la búsqueda de microorganismos provenientes de ambientes prístinos o poco explorados constituyen una alternativa interesante para descubrir nuevos compuestos bioactivos. En este trabajo se purificó un compuesto con actividad antimicrobiana producido por el hongo filamentoso Lecanicillium sp. LY 72.14, aislado de la Eco-región de las Yungas Tucumanas y seleccionado para este fin. Para ello se procedió a la producción del metabolito de interés empleando un medio de cultivo previamente optimizado. La producción se llevó a cabo por cultivo sumergido en un sistema discontinuo, con un inóculo del 10% del volumen de trabajo del biorreactor. Una vez concluido el bioproceso, se separó la biomasa fúngica por centrifugación y el sobrenadante libre de células se conservó a 4°C hasta su purificación. La actividad antimicrobiana obtenida en cada fracción del proceso de purificación fue testeada por el método de dilución crítica. El proceso de purificación consistió primeramente en una precipitación en frío con etanol 96° (2:1 v/v, etanol: sobrenadante) a partir del sobrenadante de cultivo libre de células (800 UA mL -1). Luego, el precipitado (1600 UA mL -1) fue resuspendido en buffer fosfato 20 mM pH=7 y sometido a cromatografía de exclusión molecular (SEC) a través de una matriz de Sephacryl S-300. La fracción activa proveniente de la SEC (800 UA mL -1) se concentró y finalmente se purificó mediante cromatografía líquida de alta performance (HPLC) utilizando un equipo Alliance HPLC e2695 (Waters). El compuesto se inyectó en una columna LC Yarra 3 µm SEC 2000 empleando como fase móvil un gradiente lineal de H2O bidestilada durante 15 min a un flujo de 0,5 mL·min-1. La detección del compuesto se realizó por absorbancia UV y se corroboró testeando actividad en los picos colectados. Finalmente, para corroborar la pureza del compuesto, el pico correspondiente al compuesto de interés fue reinyectado y re-cromatografiado.