ESTUDIO FUNCIONAL DE UNA SECUENCIA CANDIDATA DE Paspalum notatum MEDIANTE SILENCIAMIENO GÉNICO

POZZI, FLORENCIA I.; OCHOGAVIA, ANA C.; ACUÑA, CARLOS A.; QUARIN, CAMILO L.; FELITTI, SILVINA A.

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociendad de Biología de Rosario; 2019

Para estudiar la funcionalidad de un gen candidato se pueden utilizar tres estrategias: 1) knockout 2)sobreexpresión y 3) silenciamiento génico. El silenciamiento génico es una de las estrategias más utilizadas ya que permite modificar la expresión de uno o varios genes de manera simultánea además de permitir distintos niveles de silenciamiento a partir de secuencias candidatas cortas. El silenciamiento génico puede ocurrir en distintos niveles: transcripcional, post-transcripcional (o ARNi) y traduccional. El ARNi involucra la degradación de un ARN mensajero de secuencia específica e inicia con la presencia de ARN de doble cadena. A partir de las potencialidades de la utilización del ARNi en el análisis funcional de genes candidatos, sumado al gran número de secuencias candidatas obtenidas por estudios de expresión génica a las 3 h luego de ocurrida la polinización en P. notatum, se planteó como objetivo de trabajo: realizar el estudio funcional de un gen candidato de P. notatum, cuya función predicha bioinformáticamente estuvo asociada con el número y desarrollo de las semillas en A. thaliana. A partir de ello, se generó el ARNi en A. thaliana utilizando la secuencia del gen candidato de P. notatum, mediante el mecanismo de recombinación genética Gateway de Invitrogen. Para ello, se construyó empleando el vector pHELLSGATE12(CSIRO, Australia), un hairpin RNA (hpRNA), conformado por las secuencias del gen candidato en sentido y anti-sentido separadas por un intrón. Luego de 8 días a partir de la transformación por Floral dip de A. thaliana, se realizó el análisis fenotípico muestreando 18 silicuas de plantas control y 22 de plantas silenciadas (para ambas condiciones: 1 maceta, >30 plantas). Se cuantificaron las siguientes variables por medio de observaciones en lupa y técnicas de microscopía: número de semillas por silicua y número de abortos por silicua. La comparación estadística de las medias por Wilcoxon (p