Polimorfismo A380T en la integrina A6: diseño de cebadores y optimización de la técnica de PCR

ACOSTA KARINA BEATRIZ; LORENZINI CAMPOS MELINA NOELIA; TISCORNIA MARÍA MERCEDES; ZAPATA PEDRO DARÍO

Salta

Congreso; XLII CONGRESO ARGENTINO DE GENÉTICA - III REUNIÓN REGIONAL SAG-NOA; 2013

Sociedad Argentina de Genética

La subunidad α6 de la integrina α6β4 es codificadapor el gen ITGA6 (2q31.1). Mutaciones en este gen puedellevar a proteínas truncas o de secuencia modificadaque podrían favorecer el desarrollo tumoral y, en particular,la progresión y metástasis. El objetivo del trabajo fuediseñar cebadores por medio de estudios bioinformáticospara amplificar la región genómica de α6 que contieneel polimorfismo A380T y optimizar las condiciones de latécnica de la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR)para su análisis en muestras de cáncer de mama y controles.Los cebadores fueron diseñados mediante la secuencia delgen ITGA6 de la base de datos del GenBank en el NCBI(National Center for Biotechnology Information) y su herramientaPrimer BLAST. Se tuvieron en cuenta la cantidadde bases (18-24 pb), temperaturas de hibridación cercanas(dentro de los 5º C) y contenido de G:C entre 40-60%. Los parámetros ensayados para la optimización de laPCR fueron: concentración de MgCl2, temperatura dehibridación (Tm) y las condiciones de ciclado. Los cebadoresdiseñados con Primer BLAST mostraron parámetrosacordes con las características buscadas y fueron eficientespara la amplificación de la región genómica de ITGA6que contiene el polimorfismo A380T y se logró optimizarla técnica de la PCR con 1,5mM de MgCl2, 5pmol decada cebador y una Tm de 58º C. La técnica optimizadapermitirá mediante RFLP (Polimorfismo de Longitud deFragmentos de Restricción), analizar la relación del polimorfismoA380T de la integrina α6 con el desarrollo decáncer de mama en muestras clínicas.