Estudio del fenotipo y efecto protector de las células que componen una vacuna a células dendríticas contra el melanoma murino B16 F1

S. CAMPISANO; S. GAZZANIGA; S. MAC KEON; M.S. RUIZ; L. KORDICH ; J. MORDOH; R. WAINSTOK

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica-Reunión Sociedad Argentina de Fisiología 2011-II Congreso Nacional AACYTAL-IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal del Laboratorio y el Progreso de la Ciencia; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Fisiología, AACYTAL

La vacunación con células dendríticas (CD) derivadas de precursores provenientes de médula ósea (MO) cargadas con células tumorales apoptóticas/necróticas (ApoNec) en ratones singeneicos induce inmunidad a largo plazo contra el melanoma murino 16 F1. Nuestro propósito fue evaluar el fenotipo de las células en la vacuna y su rol en la protección in vivo. Luego de incubar las células de MO con el factor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos murino durante 7 días, se separaron las células dendríticas CD11c+ (CD+) de las demás células CD11c- (CD-) con una columna de microesferas magnéticas anti-CD11c. Ambas poblaciones se analizaron cualitativa y cuantitativamente con May Grünwald-Giemsa y se evaluaron antígenos de superficie (CD11c, MHC II, F4/80, CD14, CD11b, Ly6G y CCR7) pre y post-cocultivo con ApoNec por citometría de flujo. Se identificaron células mononucleraes y polimorfonucleares en ambas preparaciones, dterminándose un porcentaje mayor de neutrófilos en la fracción CD- (Chi2 0,0001). La fracción CD- expresó un bajo porcentaje de células CD11c+ (9,7%) y de células CD11c- F4/80+ (13%) y un elevado porcentaje de Ly6G (79,6%). En contraste, la fracción CD+ se enriqueció en CD11c+ (65%) y expresó Ly6G (59,5%) y F4/80 (7,5%), de las cuales el 6,8% fueron CD11c+F4/80+. Ambas fracciones expresaron elevados porcentajes de CD11b (CD+: 68%, CD-:79%); bajos niveles de CD14 (CD+: 2,8%, CD-:1,2%) y de CCR7 (CD+: 3%, CD-:3,4%). Después del cocultivo con ApoNec aumentó la expresión de F4/80 en CD- (83%) y de MHC II en ambas fracciones (CD+: 37,3%, CD-:46,3%). Asimismo, se realizaron experimentos de vacunación con CD/ApoNec, CD+/ApoNec y CD-/ApoNec, lográndose una protección de 50% para los animales vacunados con CD/ApoNec (Chi2 p=0,012), 20% para los ratones vacunados con CD-/ApoNec y 0% para los vacunados con CD+/ApoNec y PBS. Por lo tanto, la fracción CD- debe cooperar con la fracción CD+ en la conformación de la vacuna para generar protección.