Pigmentación y actividad enzimática oxidativa de dos cepas representativas de Pseudocercospora griseola, agente causal de la mancha angular del poroto.

BÁRCENA, A.; LLORENTE CARLA; TRONCOZO, M. I.; SAPARRAT, M. C. N.,; BALATTI, P. A.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Pigmentación y actividad enzimática oxidativa de dos cepas representativas de Pseudocercospora griseola, agente causal de la mancha angular del poroto. Bárcena1, A.; Llorente1, C.; Troncozo1,2, M.; Saparrat1, 2, 3, M.; Balatti1,3,4, P. 1INFIVE, UNLP- CCT- CONICET, La Plata, Argentina. 2Instituto de Botánica Spegazzini, FCNyM, UNLP, La Plata, Argentina. 3Cátedra de Microbiología Agrícola, FCAyF, UNLP, La Plata, Argentina. 4CIDEFI, FCAyF, UNLP, La Plata, Argentina. Introducción: Pseudocercospora griseola (Sacc.) Crous & U. Braun es el agente causal de la mancha angular del poroto (Phaseolus vulgaris L.). El hongo presenta micelio oscuro y de la misma manera que otros patógenos de P. vulgaris, coevolucionó con su hospedante, en los centros de diversificación. En el caso del poroto existen dos pooles génicos: porotos mesoamericanos y andinos, a partir de los cuales se generaron formas intra-específicas del hongo, una mesoamericana (P. griseola f. mesoamericana) y otra andina (P. griseola f. griseola). Estudios previos revelaron que P. griseola sintetiza melaninas de tipo 1,8-dihidroxinaftaleno, del que se desconocen la síntesis y su regulación así como el rol de las mismas en la patogénesis. Objetivos: Analizar la pigmentación y el contenido de pigmentos oscuros, entre ellos la melanina, en cultivos agarizados de dos cepas de P. griseola, una correspondiente al pool génico mesoamericano y otra al pool andino. Además se evaluó el nivel de actividad enzimática oxidativa con el fin de asociarla a la síntesis de pigmentos oscuros. Materiales y Métodos: Los hongos se cultivaron sobre el medio agar-glucosa-extracto de papa a 24 ±1,5 °C durante 21 días. Al cabo de este tiempo, se estimó el crecimiento miceliar y la pigmentación. Este último parámetro se determinó a través de los niveles de oscuridad de las imágenes digitalizadas de la superficie de las colonias utilizando el programa Adobe Photoshop (versión 8.0.1.). Se realizó también la extracción de melanina, cuya presencia se estimó en base a la absorbancia de una solución alcalina a 280 nm, 430 nm y 460 nm. Por otro lado se determinaron las actividades enzimáticas oxidativas como lacasa, peroxidasa, tirosinasa y cresolasa sobre alícuotas de fracciones intracelulares y asociadas a pared. Resultados: P. griseola f. griseola aislamiento S3b creció más y presentó una pigmentación menos intensa (68,2 K) que P. griseola f. mesoamericana T4 (80,1 K; p < 0,01) que mostró menor crecimiento. Sin embargo, un contenido superior en melanina se observó en el aislamiento S3b (absorbancia a 280 nm: 18,3 ±2,3 a partir de 50 mg de micelio) comparado con T4 (14,9 ±1,1, p < 0,01). Por otro lado, sólo se detectó actividad lacasa asociada a fracciones intracelulares y a pared celular, siendo similares los niveles en los aislamientos analizados. Conclusiones: Los representantes de P. griseola f. griseola y P. griseola f. mesoamericana difieren en su tasa de crecimiento y en la síntesis de melanina, existiendo una relación inversa entre los mismos. Sin embargo, la actividad de enzimas oxidativas involucradas en la síntesis de melaninas, como las lacasas, es similar en los aislamientos analizados. Estos resultados sugieren un rol de las melaninas en el crecimiento de este hongo, siendo la pigmentación un carácter con alto potencial diagnóstico para la identificación de formas específicas del hongo.