INVESTIGADORES
SOTO ESPINOZA Silvia Lorena
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción de proteínas recombinantes, producción y purificación de la proteína fluorescente verde en E. Coli M15
Autor/es:
SOTO ESPINOSA SL; VENTURA A; FARACE P.; RUFFINELLI
Lugar:
Avellaneda
Reunión:
Simposio; Simposio Argentino de los Procesos Biotecnológicos "SAPROBIO" 2016; 2016
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Quilmes
Resumen:
La materia Producción de Proteínas Recombinantes (PPREC) tiene como objetivo integrar los conocimientos y habilidades adquiridos en Ingeniería genética, Bioprocesos y Purificación de proteínas. El desarrollo de la materia se realiza mediante la dicción de clases teóricas, discusión de trabajos científicos y la realización de trabajos experimentales claves para la obtención de una proteína recombinantes a través de un sistema de producción bacteriano. Experimentalmente el estudiante evalúa, en escala analítica, la expresión de GFP-HisTag en E. coli M15 pREp4, con el plásmido de expresión pQE-30 y bajo el control del promotor Lac. En principio se evalúan distintos parámetros de la inducción, como por ejemplo, la concentración del inductor (isopropil-β-D-1-tiogalactopirosano, más conocido como IPTG), la temperatura y la composición del medio de cultivo, con el fin de encontrar la condición óptima de expresión de la proteína en estudio. En una segunda etapa se procede a realizar el escalado del proceso empleando los parámetros determinados en la optimización; utilizando la planta Bioflo III y el sistema de cultivo Batch alimentado, con glucosa como sustrato limitante. Finalmente, la tercer etapa abarca el empleo de diversas técnicas de recuperación y purificación de proteínas (entre estas ruptura celular, centrifugación y las técnicas cromatográfícas IMAC-Ni y CEM). El seguimiento de la proteína se realiza por medio de la cuantificación de la fluorescencia, determinación de la concentración por Bradford y a través de geles de poliacrilamida PAGE-SDS. El estudiante culmina la materia realizando el análisis y la interpretación global de los datos obtenidos, através de los parámetros de seguimiento del proceso: Rendimiento de la recuperación % d (Y%), Actividad específica (AE) y la producción de un único informe final.