Tecnología metabolómica aplicada al estudio de la interacción de RSUME con la proteína von Hippel-Lindau en un modelo in vitro de células de Carcinoma Renal humanas

JUAN MANUEL GUREVICH MESSINA; MARÍA ELENA KNOTT; LUCAS TEDESCO; BELÉN ELGUERO; CORA POLLAK; EDUARDO ARZT; MARÍA EUGENIA MONGE

Jornada; XXXIII Jornadas Multidisciplinarias del Instituto de Oncología Ángel H. Roffo; 2018

RSUME es una proteína inducible por hipoxia, involucrada en la sumoilación de proteínas y que se expresa en tumores neuroendocrinos y von Hippel-Lindau (VHL)-dependientes. Uno de sus blancos es la proteína supresora de tumor VHL (pVHL), que al ser inhibida lleva a la estabilización del Factor Inducible por Hipoxia 1α (HIF-1α). Como consecuencia, aumenta la expresión de proteínas relacionadas con la glucólisis y la angiogénesis, lo que conlleva a la progresión del cáncer. En este sentido, se ha demostrado que el silenciamiento de RSUME tiene un efecto anti-tumorigénico in vivo. Estos hallazgos hacen de esta proteína un candidato clave para el entendimiento del desarrollo de los tumores donde se encuentra expresada.La metabolómica es un campo emergente especializado en el análisis global de metabolitos proveniente de un sistema biológico. Una de las plataformas analíticas más utilizadas en metabolómica es la espectrometría de masas (MS) debido a su alta sensibilidad, resolución y capacidad de identificar moléculas con alta exactitud. Dicha técnica acoplada a cromatografía líquida de ultra alta performance (UHPLC) permite la detección al nivel de trazas de miles de metabolitos en matrices complejas. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de RSUME en el metabolismo celular por tecnología metabolómica mediante un estudio no dirigido (non-targeted). Se partió de la línea celular 786-O (VHL -/-; RSUME +/+), que fue transfectada con vectores de expresión de VHL y/o de silenciamiento de RSUME o sus vectores controles para generar clones estables de las siguientes 4 variantes genéticas (n=30 para cada variante): VHL -, con expresión de RSUME; VHL-, silenciado para RSUME; VHL +, con expresión de RSUME; VHL+, silenciado para RSUME. Las líneas celulares fueron crecidas e incubadas overnight con medio de cultivo fresco. Se separó el medio condicionado (exometaboloma) y se extrajeron los metabolitos intracelulares (endometaboloma) por sonicación. En ambos sistemas se precipitaron y removieron las proteínas y se prepararon controles de calidad utilizando alícuotas de todas las muestras. Una vez analizadas las muestras por UHPLC-MS, se obtuvieron las matrices de variables asociadas a los perfiles metabólicos correspondientes al endo y al exometaboloma. Una vez efectuado el curado de las matrices de variables metabólicas se procedió al análisis estadístico multivariado. Actualmente, se está trabajando en la obtención de paneles de variables discriminantes entre clases para su posterior identificación.