Regulação da expressão gênica pelo fosfato inorgânico no fungo fi lamentoso Neurospora crassa: possível papel do gene preg

LEAL J; GRAS DE; MARTINEZ-ROSSI NM; ROSSI A

Águas de Lindóia

Congreso; 51º Congresso Brasileiro de Genética; 2005

Sociedade Brasileira de Genética

Em Neurospora crassa, o gene preg está envolvido na regulação do sistema de aquisição de fosfato (Pi), juntamente com os genes nuc-1, nuc-2 e pgov. Segundo um modelo proposto, em condições de saturação de Pi, o produto do gene preg, forma um complexo com o produto do gene pgov, o qual antagonizaria a ação do fator de transcrição NUC-1, responsável pela expressão de fosfatases, fosfato permeases e nucleases. Sob condições de Pi limitante, a ação desse complexo seria antagonizada pelo produto do gene nuc-2. O gene nuc-2 seria o componente que transmite o sinal de ativação desse circuito regulatório e sua ação é inativada pelo Pi ou um co-repressor derivado dele. As proteínas NUC-1, PREG, PGOV e NUC-2 mostram similaridade com as proteínas PHO4, PHO80, PHO85 e PHO81 de Saccharomyces cerevisiae, respectivamente. PHO80 é uma ciclina, e compõe um complexo quinase juntamente com PHO85, responsável pela fosforilação de PHO4. O mutante pregc (mutação de perda de função) quando cultivado em condições de saturação de Pi, não secreta a mesma forma molecular de fosfatase ácida secretada pela linhagem selvagem quando crescida em Pi limitante, indicando que o papel desse gene seria também controlar modifi cações pós-transcricionais e não apenas regular a transcrição dos genes estruturais das fosfatases Pi-repressíveis. Portanto, ainda existe controvérsia quanto a ação do gene preg na regulação do sistema fosfato em N. crassa. Diante disso, o presente trabalho visou identifi car genes envolvidos nos mecanismos de adaptação à sinalização pelo Pi e pelo pH sob infl uência do gene preg, através da técnica de DDRT-PCR. O RNA total foi extraído das linhagens 74A e pregc cultivadas em pH 5.4 e pH 7.8, em baixa concentração de Pi. Foram recortadas e clonadas 21 bandas, sendo que a maioria delas mostra-se diferencialmente expressa em função da mutação. Até o presente, 16 bandas foram seqüenciadas e submetidas a análises através de ferramentas de bioinformática, como a ferramenta BLASTx. Os genes identifi cados como diferencialmente expressos codifi cam proteínas as quais mostraram similaridade com uracil-5-carboxilato-decarboxilases, metiltransferases ubiE/COQ5 e com proteínas hipotéticas de outros fungos, sendo que algumas apresentam domínios conhecidos, entre eles b-lactamase e dehidrogenase dependente de FMN (FMN_dh). A proteína uracil-5-carboxilato-decarboxilase participa no metabolismo da timina, a qual parece estar envolvida numa via complexa que regula a expressão das fosfatases (Schweingruber et al., 1992. Genetics 130: 445-449), indicando que tanto a mutação pregc quanto o pH provocam variações em muitos processos celulares, confi rmando a complexidade da resposta adaptativa ao Pi em N. crassa.