Efecto de la expresión crónica de TNF en la viabilidad de las neuronas de la substantia nigra de ratas adultas.

ANA DE LELLA EZCURRA; MARIELA CHERTOFF; CARINA CINTIA FERRARI; FERNANDO PITOSSI

Taller; VII Taller Argentino de Neurociencias; 2005

La Enfermedad de Parkinson (EP) es una patología de etiología desconocida, cuyo rasgo distintivo es la muerte neuronal en la substantia nigra (s.n.). En muestras post-mortem de pacientes parkinsonianos y en modelos animales se ha visto activación de la microglía en esta región del cerebro. A su vez, la expresión de citoquinas pro-inflamatorias como el factor de necrosis tumoral a (TNF) se ha relacionado tanto a la muerte como a la sobrevida neuronal en diversas enfermedades neurodegenerativas. Mediante un modelo que combina ratones knock-in, adenovectores recombinantes y el sistema loxP se ha logrado la expresión en forma condicional de distintos niveles de TNF en la s.n. De este modo, se ha demostrado que la sobre-expresión de esta citoquina tiene un efecto neurodegenerativo, mientras que al ser expresada basalmente se observa un efecto protector frente a una neurotoxina, la 6-hidroxidopamina. El objetivo del presente trabajo es estudiar el efecto de la expresión crónica de distintos niveles de TNF en la sobrevida de las neuronas de la s.n. de ratas adultas, con el fin de corroborar los datos obtenidos en ratones knock-in. Para ello, se inyectó en la s.n. de ratas adultas distintas concentraciones de un adenovector recombinante que expresa TNF, usándose como control un adenovirus que expresa la b-galactosidasa. Al inyectar en la s.n. altas concentraciones del adenovector que expresa TNF se observa una pérdida progresiva de neuronas TH positivas en esta región. A los 7 días no se detecta un efecto neurodegenerativo. Sin embargo, luego de 14 días comienza a disminuir el porcentaje de neuronas TH positivas en el lado ipsilateral con respecto al lado contralateral a la inyección (82% al utilizar 107 partículas y 70% con 5*107), y a los 21 días esta disminución se acentúa (76% y 62% respectivamente). Al inocular 5*107 partículas del adenovirus que expresa la b-galactosidasa se observa un 85% de células TH positivas a los 21 días, lo que difiere significativamente del tratamiento con TNF. Por otro lado, se evaluó el impacto de este efecto neurodegenerativo del TNF sobre el comportamiento de los animales. Al realizar el test del cilindro puede observarse una disminución en el uso de la pata contralateral a la inyección en los animales que sobre-expresan TNF. Frente a la administración de apomorfina (un agonista dopaminérgico), las ratas inyectadas con el adenovector que expresa TNF realizan un mayor número de vueltas netas contralaterales que los controles. Si bien las diferencias obtenidas en estos estudios comportamentales no son significativas, muestran una clara tendencia que sugiere que el efecto del TNF sobre la sobrevida de las neuronas de la s.n. tiene repercusiones funcionales. Estos resultados permitieron corroborar el efecto neurodegenerativo de la sobre-expresión de TNF observado en ratones knock-in, utilizando un modelo animal diferente y otro sistema de expresión de la citoquina. Además, para estudios posteriores el modelo de rata tiene numerosas ventajas frente al de ratones knock-in, como mayor cantidad de material biológico y manipulación más sencilla.