Clonagem e expressão de 3 peptídeos antimicrobianos produzidos por Lactobacillus sakei subsp. sakei 2a em sistema heterólogo.

MONIKA FRANCISCA KRUGER; KATIA GIANNI DE CARVALHO LIMA; MATHEUS DE SOUZA BARBOSA; EMILIANO JESUS SALVUCCI; FERNANDO SESMA; BERNADETTE DORA GOMBOSSY DE MELO FRANCO

Brasilia, Brasil

Congreso; XXIV Congresso Brasileiro de Microbiologia; 2007

Bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos ativos contra diversos patógenos de interessse em alimentos,principalmente Listeria monocytogenes. Lactobacillus sakei subsp. sakei 2ª produz a bacteriocina sakacina 2ª e, pelo menos, outros oito peptídeos com comprovada atividade antimicrobiana. Entretanto, a produção destes peptídeos pela cepa original se dá em pequena escala, dificultando a sua utilização. Uma das estratégias para aumentar a produção é a clonagem dos genes envolvidos na sua síntese. Este trabalho objetivou clonar os genes responsáveis pela produção da sakacina 2a, uma proteína ribossomal e um peptídeo tipo histona em E. coli, avaliando a expressão e produção dos antimicrobianos pela cepa heteróloga. Inicialmente foi feita a extração direta do DNA para investigar os genes responsáveis pela produção dos antimicrobianos. Os genes de interesse foram amplificados por PCR utilizando-se primers específicos. Os fragmentos amplificados foram extraídos, clonados em plasmídeos vetores tipo TOPO2.1(GE Healhtcare) e introduzidos em células competentes E. coli DH10β. Os resultados demonstraram que houve a inserção corretada seqüênciados genes e de suas orientações, porém não houve a expressão de nenhum dos peptídeos no sobrenadante das culturas. Experimentos com outras cepas de E.coli competentes e outros vetores de expressão estão sendo realizados para a indução da expressão dos peptídeos antimicrobianos em sistema heterologo.