Tuberculosis en animales silvestres. Optimización de técnicas diagnósticas para mejorar la sensibilidad y especificidad de detección

PONCE LOREANA; MARCELA MARTINEZ VIVOT; CARUSSO, C; ROSSO PAULA; PETTA ADRIAN; JIMENA MARFIL; SOLEDAD BARANDIARAN

Jornada; XXXII Jornadas Jóvenes Investigadores; 2019

La tuberculosis bovina es una enfermedad endémica en la Argentina que afecta distintas especies domésticas y silvestres. Su prevalencia en la fauna silvestre del país es desconocida. El complejo Mycobacterium tuberculosis (CMT), complejo Mycobacterium avium (MAC) y las micobacterias no tuberculosas (MNT) se distribuyen en todo el mundo y muchas veces representan un problema para salud humana y veterinaria. Teniendo en cuenta la creciente importancia epidemiológica de la interrelación entre la fauna silvestre, la ganadería y el ser humano, el desarrollo de herramientas de detección rápida de alta especificidad y sensibilidad es vital. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una buena técnica para identificar las diferentes micobacterias. Las secuencias blanco más utilizadas son hsp65 para detectar género, IS6110 para micobacterias del CMT e IS1245 para MAC. Esto significa realizar como mínimo 3 PCR independientes para la identificación molecular de estos tres grandes grupos. Por ello, el objetivo de este plan de trabajo es desarrollar una PCR multiplex para detectar y diferenciar, en forma simultánea, las principales micobacterias que afectan a la fauna silvestre de forma simple y rápida. Se adaptará la técnica de PCR tetraplex a punto final descripta por Wilton & Cousins (1992). Con ella se espera lograr diferenciar, en una sola amplificación, las micobacterias pertenecientes al CMT, las involucradas en el complejo MAC y, dentro de las MNT diferenciar, a su vez, M. intracellulare, especie muy poco estudiada en individuos de fauna silvestre. Se utilizarán los primers MYCGEN-f/MYCGENr (que identifica género), MYCGEN-f/MYCAV-r (que identifica Mycobacterium avium), MYCINT-f/MYCGEN-r (que identifica Mycobacterium intracellulare) y TB1-f/TB1-r (que identifica CMT). Se utilizará el ciclado propuesto por los autores, con una modificación (agregado de una elongación final a 75ºC durante 10 min.). En la actualidad, se está trabajando en la puesta a punto de la técnica en la Cátedra de Enfermedades Infecciosas de la Facultad de Ciencias Veterinarias. La aplicación de esta técnica permitirá obtener información sobre la presencia de micobacterias, patógenas y saprófitas, en muestras de fauna silvestre. A su vez, podría aportar información para demostrar la existencia de reservorios de tuberculosis en nuestro país.