GENERACION DE VACUNAS ALTERNATIVAS CONTRA LA GRIPE UTILIZANDO VECTORES VIRALES HETEROLOGOS. ?DISPLAY? EN LA SUPERFICIE DE BACULOVIRUS DE 4 COPIAS DE LA PORCION EXTRACITOPLASMATICA DE LA PROTEINA MATRIX 2 (M2E).

JM MORALES; P MOLINARI; LA BOADO; N MATTION; TABOGA O; ALVAREZ, P

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

Introducción: La falta de cobertura heterosubtípica de las vacunas enuso para el control de la influenza humana es un serio problemapotencial dado el tiempo prolongado del sistema de producción actualpara generar una vacuna contra una nueva cepa. El surgimiento de unacepa de alta virulencia podría convertirse en un problema muy grave.Por esta razón, es de interés de nuestro laboratorio, la generación deuna vacuna del tipo ?universal? contra la gripe. Es decir, una vacunaque genere una respuesta inmune ?cross-protectora? contra distintascepas del virus y que, por lo tanto, no requiera de una actualizaciónanual. Con este objetivo se eligió como antígeno el péptido extracitoplasmáticode la proteína Matrix 2 (M2e) ya que se ha demostrado,que la inmunización con este péptido genera una respuesta inmuneprotectora contra el virus de influenza (VI). Además, dado que estepéptido se encuentra altamente conservado entre las distintas cepas deinfluenza A, la respuesta generada es, en la mayoría de los casos, crossprotectora.Así también, trabajos previos de nuestro laboratoriodemostraron la capacidad protectora del ?display? en la superficie debaculovirus (Bv) de 1 copia de M2e como fusión a la proteína gp64(principal glicoproteína de membrana de Bv). Objetivo: Dado que se hademostrado que la inmunización con más de una copia del péptidoM2e aumenta significativamente la respuesta obtenida, en este trabajodecidimos evaluar la capacidad inmunogénica de un péptidoconteniendo 4 copias en tandem de M2e también vehiculizado en lasuperficie de Bv. A diferencia de lo realizado en el trabajo anterior, eneste caso el péptido fue fusionado a la secuencia de anclaje enmembrana de la glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular(VSV) y no a la gp64, ya que la fusión a esta secuencia permite el?display? en la superficie de los viriones no solo en los polos de laspartículas, como ocurre con las fusiones a gp64, sino también en loslaterales de la misma. Metodología: Para generar el sistema de?display? en la superficie de Bv, utilizamos un vector conteniendo elpéptido señal de gp64 y la región de anclaje de VSV mencionadapreviamente. Para obtener los Bv recombinantes se utilizó el sistema?Bac to Bac? (Invitrogen) de acuerdo a las especificaciones delfabricante. Resultados: En el presente trabajo se diseñó unoligonucleótido sintético conteniendo 4 copias de M2e y éste fueclonado en el vector detallado previamente. Se obtuvieron losbácmidos recombinantes y se transfectaron células de insecto conestos bácmidos. Se obtuvieron Bv recombinantes que incorpararon elpéptido 4M2e. Conclusión: Se produjeron stocks purificados de estosvirus recombinantes los que serán utilizados, en la etapa siguiente, parala inmunización de ratones y evaluar, así, la capacidad protectora deesta vacuna contra el desafío con virus de influenza