DESARROLLO DE TECNOLOGÍA VACUNAL CONTRA VIRUS DE LA ANEMIA INFECCIOSA DEL SALMON

VILLARREAL, F M; BOADO, L A; GOMEZ J M; POGGIO T V

Valle Hermoso, Cordoba

Jornada; LVII Reunion de la Sociedad Argentina de Virologia; 2022

El agente viral (ISAv) responsable de la anemia infecciosa del salmón es un virus de la familia Orthomyxoviridae, del género Isavirus que afecta salmonidos de cultivo. En 2007, Chile sufrió el mayor desastre productivo y sanitario por un brote de ISAv provocando mortalidad y reducción del crecimiento de los peces en cultivo. El virus posee proyecciones de superficie formadas por glicoproteínas: la Hemaglutinina (HE) y una proteína de fusión, involucradas en la entrada del virus a la célula hospedadora. Se propone el desarrollo de un prototipo vacunal intra peritoneal producido en baculovirus recombinante que exprese el antígeno HE para inducir respuesta inmune sistémico-mucosal y protección contra la infección por ISAv.Se realizo el análisis de las secuencias de HE de cepas circulantes y se seleccionaron motivos lineales mediante el software de predicción de epítopes de anticuerpos (IEDB Analysis Resource) con el fin de establecer una secuencia de ADN que exprese el inmunógeno candidato. Se realizó el subclonado de la secuencia sintética en el vector donador para expresar el antígeno seleccionado en el sistema baculovirus/células de insectos. Luego se transformaron cepas de E.coli DH10 BAC para obtener el bácmido recombinante testeándose colonias azules por amplificación por PCR. La secuencia genómica de la HE de ISAv (GenBank: AF220607.1.) presentó homología con más de 100 secuencias ya descriptas y una identidad mayor al 86% en todos los casos. Según el tamaño de los epítopes y el score que el software analiza se obtuvieron 17 posibles motivos candidatos. Se seleccionaron solo 7 epítopes que definieron la secuencia de ADN de interés la cual fue sintetizada y subclonada satisfactoriamente en el vector donador corroborándose la identidad del fragmento y su correcto marco de lectura por secuenciación. El bácmido recombinante expresando la HE fue aislado exitosamente. Próximamente comenzaremos el proceso expresión del antígeno recombinante en el sistema baculovirus/celula de insecto con el fin de evaluar posteriormente su antigenicidad y el % de protección a través de formulaciones experimentales con distintos adyuvantes que generen respuesta inmune sistémico-mucosal en salmónidos.