CLONADO, EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE LA NUCLEOPROTEÍNA DE UNA CEPA ARGENTINA DEL VIRUS DISTEMPER CANINO, CON POTENCIAL APLICACIÓN EN EL DESARROLLO DE INMUNÓGENOS DE NUEVA GENERACIÓN

GALLO CALDERÓN, M.; ROMANUTTI, C.; BOADO L; KELLER, L.; LA TORRE, J

REVISTA DE MEDICINA VETERINARIA

Buenos Aires: Vuala Comunicación

Lugar: Buenos Aires; Año: 2022 vol. 2

El Virus Distemper Canino (VDC), se encuentra distribuido en todo el mundo, afectando a mascotas y a especies silvestres. Si bien existen vacunas atenuadas, en los últimos años, se ha registrado en todo el mundo, un aumento de casos de Distemper (tanto en animales vacunados como en no vacunados). Dada la falta de actualización de las cepas vacunales, y al poseer un genoma a ARNsc, (con alta tasa de mutación), surgen cepas emergentes pobremente protegidas por los anticuerpos vacunales. En el ICT Milstein se realiza el diagnóstico molecular del VDC, lo cual nos permite estudiar las cepas salvajes circulantes. A raíz de ello, nos hemos propuesto el desarrollo de inmunógenos de nueva generación, para lograr un mejor y efectivo control de esta enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue clonar, expresar y purificar la nucleoproteína (NP), para iniciar suestudio como inmunógeno, en el modelo murino. Pudimos amplificar por PCR el gen completo de la NP de una cepa local, el cual fue clonado en pGemT y luego subclonado en el vector pRSET-B. Se indujeron cultivos de {E. ColiBL21} con 1 mM de IPTG en medio LB, 5 horas a 37 °C. Estos fueron sonicados y la NPr purificada obteniéndose una concentración de 0.4 mg/ml. Se puso a punto un ELISA con sueros caninos y un anticuerpo monoclonal anti NP y se determinó 0.25 ug/ml de NPr adsorbida en la placa, como óptima concentración para utilizar posteriormente. Por otro lado, ratones fueron inmunizados intraperitonealmente con 3 dosis de 10 μg de NPr purificada más adyuvante o con PBS. Los títulos obtenidos en ELISA en ratones inmunizados con NPr fueron significativamente mayores (3.7) a los inmunizados con PBS (1.7). Si bien estos resultados son preliminares, obtuvimos y purificamos NPr, utilizándose como inmunógeno en el modelo murino.