Estudio de la cascada de señalización iniciada por AMPc durante la Reacción Acrosomal” Branham M

BRANHAM MT; ZARELLI V; RODRIGUEZ JF; TOMES CN

Buenos Aires, Argentina

Congreso; V Congreso Nacional de Andrología; 2007

La reacción acrosómica (RA) es un proceso que habilita a los espermatozoides para penetrar la zona pelúcida y fusionar con la membrana plasmática del ovocito durante la fertilización. En el espermatozoide varios caminos de señalización requeridos para adquirir la capacidad de fertilizar al ovocito dependen de un aumento de la concentración de AMPc con la consiguiente activación de la proteína quinasa A. Nuestro laboratorio ha descripto un camino de señalización por el cual AMPc induce la RA a través de Epac, un intercambiador de nucleótidos de guanina para las proteínas Rap. Las Rap son interruptores moleculares que se mantienen activos mientras estén unidos al GTP e inactivos al unirse al GDP. Por medio de la activación de Rap, AMPc influencia diversos procesos celulares, incluyendo la secreción. Nuestros objetivos son desentrañar las cascadas de transducción de señales relacionadas al AMPc-Epac durante la exocitosis acrosomal, así como establecer el requerimiento y sitio de acción de Rap y posible conexión de esta vía con la de Rab3. Por medio de Western blots e inmunofluorescencia determinamos la presencia y localización acrosomal de Rap en espermatozoides humanos. Su participación en la RA y ubicación en la cascada de señalización se detectaron por medio de ensayos funcionales con espermatozoides humanos permeabilizados con SLO (estreptolisina-O). El estado acrosomal se evaluó tiñendo con FITC-acoplado a PSA .Para estudiar el estado de activación de Rap se utilizó un ensayo de pull down inmovilizando un dominio proteico con alta afinidad por Rap en estado GTP. Por medio de ensayos funcionales, pull down y actividad GEF de Epac estudiamos la interacción entre Epac y Rab3. Conclusiones: Rap está presente en la región acrosomal de espermatozoides humanos. Es requerida para la RA antes de la salida del calcio acrosomal. Calcio induce la activación de Rap. Epac induce activación indirecta de Rab3A.