Método para la extracción de RNA basado en el uso nanopartículas magnéticas

CAPRIOTTI, NATALIA

Posadas ? Misiones

Congreso; SAPROBIO 2021 6º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2021

Universidad Nacional de Misiones

El aislamiento y purificación de RNA decalidad es un paso fundamental para asegurar una alta especificidad y sensibilidad enla detección, cuantificación y diagnóstico deenfermedades por RT-qPCR. Los métodosde obtención de ácidos ribonucleicos deben ser robustos y de alto rendimiento conalta capacidad de fabricación y distribución.En la actualidad, la mayoría de los kits comerciales utilizados son costosos, poseen amenudo múltiples componentes que no sonfácilmente reemplazables y su suministro nose puede garantizar dado que son importados. Además, algunos de ellos requierende equipamiento sofisticado, no siempredisponibles en los laboratorios de investigación y diagnóstico. Por ende, la metodologíadisponible no ofrece suficiente flexibilidad ydisponibilidad cuando se trata de una granepidemia o una pandemia, como lo es la deCOVID-19. El objetivo del trabajo es proporcionar un protocolo de extracción de RNAbasado en perlas magnéticas de sílice debajo costo, independiente de equipamientosofisticado y de producción nacional. El procedimiento de extracción por este métodoincluye etapas de inmovilización rápida yeficiente de las moléculas de RNA sobre lasuperficie de las nanopartículas y la posterior aplicación de campos magnéticos lo cualpermite separar de forma rápida y eficientelos ácidos nucleicos evitando pasos de centrifugación. El cambio en la concentraciónde sales en el medio permite una elucióneficiente para los posteriores pasos de amplificación por el método de elección. Se hanrealizado pruebas de extracción en distintasmuestras biológicas: tejidos provenientes deinsectos, línea celular de pulmón y muestrasde hisopado oro- y nasofaríngeos de pacientes sospechados de tener coronavirus;se obtuvieron niveles de rendimiento y calidad de RNA similares a los kits disponiblescomercialmente y además hemos logradoniveles de Ct (-Cyclethreshold-) igualablespor RT-qPCR. En esta presentación se describirán los antecedentes de esta metodología,el estado actual del proyecto y las perspectivas de implementación en laboratorio