Utilización de diferentes análisis de datos para estudiar la viabilidad y adhesión en células madre mesenquimales de conejo sobre cubiertas biomiméticas

D'ELÍA NOELIA LAURA; MATHIEU COLLEEN; HOEMANN CAROLINE; GRAVINA ANABELA NOEL; SARTUQUI JAVIER; MESSINA PAULA VERÓNICA

Congreso; XXXII Reunión Anual Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2015

Se sembraron células madre mesenquimales de conejo (rMSC) sobre cubiertas formadas por diferentesproporciones de hidroxiapatita/colágeno tipo I (HA/CoI), en un intento de imitar el entorno de remodelaciónósea en el que se adhieren y diferencian. El material de HA se obtuvo previamente en el laboratorio y seencuentra extensamente caracterizado; está compuesto por nanopartículas con características fisicoquímicassimilares a las de la matriz mineral ósea y la topografía submicrométrica. Recientemente se demostróque un aumento en la expresión de la proteína α-actina de músculo liso (α-SMA) se asocia con el potencialosteogénico de las MSC y se encuentra relacionado con su diferenciación a osteoblastos. Además, se sabeque la organización del citoesqueleto celular, incluyendo la ubicación de los filamentos de actina, es sensiblea la topografía del material. Por lo tanto, durante este estudio se analizó la adhesión de rMSC sobre recubrimientosbiomiméticos de HA/CoI con las mismas proporciones que se encuentran en la matriz inorgánica/orgánica del tejido óseo. Se realizaron ensayos de inmunodetección de la proteína α-SMA, se contabilizóel número de células adheridas mediante la utilización del reactivo de Hoechst y además se determinó laactividad metabólica celular mediante MTT. Las imágenes obtenidas por microscopia láser confocal mostraronque las células adheridas sobre las distintas coberturas presentaban una morfología poligonal y ademásse observó la presencia de extensiones citoplasmáticas típica de las MSC. Las células se adhirieronhomogéneamente sobre los recubrimientos biomiméticos donde se utilizaron cantidades de HA entre 15 y 62 μg/cm2 más 31 μg/cm2 de CoI. El análisis semicuantitativo de las imágenes obtenidas por microscopiaconfocal mostraron que la expresión de la proteína α-SMA no varió en comparación con las muestras control.Además, la actividad metabólica mitocondrial no se vio afectada (p>0,10). Por otro lado, las célulassembradas sobre coberturas en las cuales se utilizaron cantidades cien veces más grandes de HA presentaronaspecto redondeado, con menos prolongaciones citoplasmáticas, por lo tanto la adhesión y la actividadmetabólica se vieron inhibidas (p