PERSONAL DE APOYO
CAO Gabriel Fernando
congresos y reuniones científicas
Título:
EL TRANSPORTE DE INSULINA AL MITOPLASTO ES DEPENDIENTE DE LA DEGRADACIÓN MITOCONDRIAL
Autor/es:
CRESTO JC; CAMBEROS M; CAO G; MARTUCCI L
Reunión:
Congreso; LV REUNION CIENTIFICA DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION CLINICA; 2010
Resumen:
Objetivos: En estudios previos observamos que la degradaciónlimitaba la disponibilidad de insulina para su incorporación en mitoplastos,por lo tanto estudiamos el transporte y la degradación deinsulina para determinar el grado de interacción. Métodos: EDI seobtuvo de músculo de rata por sucesivos pasos cromatográficos.Mitocondrias hepáticas aisladas según Parson, fueron recuperadase incubadas a 25°C o 30°C, oxígeno 100%, 125I-insulina (105 cpm)e insulina fría a tiempos y dosis variables. La reacción se detuvocon N-etilmaleimida 2 mM y los mitoplastos (M) se aislaron dela membrana externa y espacio intermembrana con digitonina.La degradación se determinó con TCA 5%, cromatografía enSephadex G50 y anticuerpos específicos. Resultados: A 25°C ladegradación fue mínima y la insulina se acumuló en M. A esta temperatura la interacción EDI-insulina y mitoplasto puede seranalizada como una reacción bimolecular, donde ambos complejosreaccionan independientemente siguiendo una cinéticade 2do. orden (constante k, control: 0.496; IDE: 0.336, control+Bacitracin: 0.681; IDE+Bacitracin 0.523; control+DNP: 0,505;IDE+DNP: 0,548). A 30°C la acumulación de insulina en M fuemenor y la degradación en el buffer de incubación fue total. Estoes, toda la insulina fue degradada en forma casi instantánea. Diezmil ng de insulina saturaron parcialmente el transporte pero nola degradación en el buffer de incubación. N-ethilmaleimida 0,1mM e insulina hasta 10000 ng incrementaron el transporte a Msin modificar la degradación en el buffer de incubación. 1 mM deN-ethilmaleimide asociado a 10000 ng de insulina logró disminuirla degradación en el buffer de incubación (control: de 87 a 56%,EDI: de 84 a 62%). Conclusión: la magnitud y velocidad de ladegradación es el mecanismo regulador en la incorporación deinsulina al mitoplasto.
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