ENSAYOS DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA LACASA A BAJAS TEMPERATURAS CON PLEUROTUS DE DIFERENTES REGIONES DE ARGENTINA

RUGOLO MAXIMILIANO; KUHAR FRANCISCO; LECHNER BERNARDO ERNESTO; RAJCHENBERG MARIO

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología; 2014

Las oxidasas fúngicas, dentro de las cuales se encuentran las lacasas, son una de las principales enzimas implicadas en la deslignificación por hongos de pudrición blanca. El género Pleurotus (Agaricales, Pleurotaceae) constituye un grupo de especies con propiedades medicinales, gran valor nutricional y numerosas aplicaciones medioambientales y biotecnológicas, siendo uno de los grupos cultivados más frecuentemente.Las lacasas pueden ser utilizadas en procesos como la clarificación del mosto de vino, jugos de frutas o cerveza, ya que pueden eliminar los fenoles presentes en los mismos. Estas aplicaciones biotecnológicas requieren accionar a bajas temperaturas.Algunos autores proponen que la actividad a baja temperatura es esperable en enzimas de baja estabilidad térmica, debido a lo que denominan "flexibilidad del sitio activo". El objetivo del trabajo fue ensayar tanto la actividad lacasa de cepas del género Pleurotus de diferentes regiones de Argentina, (Chubut, Neuquén, Buenos Aires y Misiones) a bajas temperaturas, como así también la estabilidad térmica enzimática y corroborar si el buen rendimiento en frío está asociado a las bajas termoestabilidades.Se realizaron por triplicado medios de cultivo líquido con extracto de malta al 2% de 13 cepas del género Pleurotus, 10 de P. ostreatus provenientes de Neuquén creciendo sobre Araucaria araucana, 1 de P. pulmonarius proveniente de Misiones sobre A. angustifolia, 1 de P. ostreatus de Chubut y de Buenos Aires creciendo sobre Populus. Luego de 30 días se tomaron muestras del sobrenadante.En estas muestras se cuantificó la actividad lacasa midiendo la oxidación de DMP (2,6-dimetoxifenol) espectrofotométricamente a 469nm a una temperatura de 30°C y 10°C a fin de evaluar qué porcentaje de la actividad siguió siendo aprovechable en un proceso de baja temperatura. Posteriormente se evaluó la termoestabilidad sometiendo los sobrenadantes a 80°C durante 20 minutos y midiendo la actividad remanente a 30°C.Las cepas de Neuquén presentaron los mayores valores de mUE, siendo la cepa MR12509 la de mayor actividad enzimática con 176,96 mUE. Las cepas MR12516 y CIEFAPcc288 resultaron ser las que presentaron mayor retención de la actividad enzimática en frío con 85,32% y 93,15% respectivamente, y las de mayor estabilidad térmica respecto a la actividad a 30°C con valores de 1,27% y 1,05%, respectivamente.La mayor termoestabilidad de las cepas con alta actividad en frío no permitieron corroborar la hipótesis de la flexibilidad del sitio activo para el sistema empleado.