“Multilocus Sequence Typing: en busca de un nuevo método de referencia para tipificación de aislados de Trypanosoma cruzi”

JUAN JOSÉ LAUTHIER, NICOLÁS TOMASINI, MARÍA MERCEDES MONJE-RUMI, ANAHÍ MAITEN ALBERTI-DAMATO, PAULA GABRIELA RAGONE, MIGUEL ÁNGEL BASOMBRÍO, PATRICIO DIOSQUE

Bogota

Congreso; XX Congreso Latinoamericano de Parasitología y XV Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical; 2011

Facultad de Ciencias Universidad de los Andes Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical

Introducción: actualmente la tipificación molecular de aislados de Trypanosoma cruzi, agente causal de la Enfermedad de Chagas, se realiza mediante el empleo de técnicas basadas en el análisis visual de patrones de bandas. La técnica de tipificación por secuenciación multilocus (MLST, Multilocus Sequence Typing) es una herramienta ideada originalmente para la tipificación de bacterias, la cual se basa en la secuenciación de genes metabólicos de copia simple de ≈500pb. Esta herramienta minimiza la interpretación subjetiva de datos, ya que se trabaja directamente con secuencias nucleotídicas, y además presenta la ventaja de que los datos de secuencias son fácilmente intercambiables mediante bases de datos a través de internet. Materiales y Métodos: en el presente trabajo examinamos fragmentos de 10 genes metabólicos en cepas de referencia provenientes de toda América y un conjunto de aislados provenientes de la Provincia de Chaco, Argentina. Las secuencias obtenidas fueron manipuladas de tres modos diferentes: i- identificación de secuencias diploides tipo; ii- duplicación de sitios polimórficos; y iii- concatenamiento de las secuencias de los 10 fragmentos de genes estudiados. Estos datos fueron utilizados para la construcción de árboles Neighbor-Joining. Resultados: se obtuvieron árboles a partir de los cuales se identificaron los 6 DTUs de T. cruzi con altos valores de bootstrap. Se identificaron 5 genotipos de TcI y 2 de Tc V para los aislados provenientes de la Provincia de Chaco. Conclusiones: los resultados obtenidos muestran que el enfoque de MLST representa una herramienta promisoria para la tipificación de aislados de T. cruzi, ya que presenta un alto poder resolutivo y fácil reproducibilidad, lo cual convierte al MLST como un excelente candidato a convertirse en el gold standard para la tipificación molecular de aislados de T. cruzi. Financiado por: Chagas Epinet, a European Union Seventh Framework Program e IRD-DSF.