Dexametasona Nanoliposomal

ALTUBE MARÍA JULIA; RONCAGLIA DIANA; MORILLA MARÍA JOSE; ROMERO EDER LILIA

Congreso; Nanocordoba 2014; 2014

Dexametasona (DEX) es un glucocorticoide cuyo mecanismo consiste en suprimir la respuesta inflamatoria luego de unirse a su receptor en el citoplasma celular (Shelby et al, 2002). Debido a que los macrófagos juegan un rol clave en el desarrollo de la inflamación, un targeting de dexametasona nanoliposomal directo a los macrófagos podría producir una mejor performance del efecto anti-inflamatorio de la DEX libre (Wijagkanalan et al, 2008 y Bartneck et al, 2014). Previamente se ha demostrado que nanoliposomas preparados con lípidos polares totales (LPT), obtenidos a partir del arquea hiperhalófila Halorubrum tebenquichense, son más capturados por macrófagos de ratón J774A.1 que por queratinocitos humanos Hacat (Higa et al, 2012). El objetivo del trabajo es el desarrollo de nanoliposomas conteniendo DEX, y exhibiendo arqueolípidos cuyos residuos azucarados serian ligandos del RM en macrófagos. Se aislaron diferentes fracciones arqueolipidicas a partir de una mezcla LPT sometida a cromatografía en columna de silica gel y posterior cromatografía en capa fina. Luego se realizó un espectro de masa mediante la técnica ESI-MS y se cuantificaron los glicoarqueolipidos (GA) midiendo azucares totales mediante el método de antrona (Brown et al, 1955). Se obtuvo una fracción enriquecida en un 56 ± 10 % p/p en GA, obteniéndose un rendimiento de 1,7 ± 0,8 mg de GA a partir de 100 mg de LPT. Se prepararon diferentes matrices lipídicas con fosfatidilcolina de soja (SPC), colato de sodio (ColNa) y concentraciones crecientes de , en una relación molar SPC:ColNa: GA, 1:0,15:0,4 (L-S1X) y SPC:ColNa: GA 1:0,15:0,8 (L-S2X) e incorporando DEX, SPC:ColNa: GA:DEX 1:0,15:0,4:0,1 (L-S1X-DEX); SPC:ColNa: GA:DEX 1:0,15:0,8:0,1 (L-S2X-DEX); con una concentración inicial de DEX de 2,2 mg/ml. La preparación se realizó por el método de resuspensión de la película lipídica y DEX se cuantificó por HPLC. Las formulaciones liposomales obtenidas, L-S1X-DEX y L-S2X-DEX tuvieron concentraciones finales de DEX de 1,0 ± 0,3 y 1,1 ± 0,5 mg/ml y un porcentaje de encapsulación de 47 y 48%, respectivamente. A su vez se determinó el tamaño promedio de los nanoliposomas, índice de polidispersidad (pdi) y potencial Z utilizando un nanoZsizer. Los tamaños obtenidos para los nanoliposomas vacíos fueron 200 nm; pdi de 0,2 y potencial Z de -12mV. Al incorporar DEX el tamaño, pdi y potencial Z se mantuvieron constantes. Se observaron, por microscopia electrónica de transmisión, las formulaciones L-S2X y L-S2X-DEX que presentaron tamaños en el orden de los 200 nm. Se realizaron ensayos de citotoxicidad de las formulaciones nanoliposomales y DEX libre sobre líneas celulares de epitelio de riñon, Vero, Hacat y J774 A.1; usando el método de MTT. En Vero y Hacat las formulaciones L-S1X, L-S1X-DEX, no afectaron la viabilidad celular entre 5 ? 50 µg/ml DEX y 0,1- 2 mg/ml de fosfolípidos. Las formulaciones L-S2X y L-S2X-DEX disminuyeron la viabilidad celular en la concentración más alta 2 mg/ml de lípidos y 50 µg/ml de DEX. DEX libre afectó la viabilidad celular a 50 µg/ml. Por otra parte, en J774A.1 las formulaciones liposomales vacías y con DEX no afectaron la viabilidad en todas las concentraciones testeadas (5 ? 50 µg/ml de DEX y 0,1- 0,2 mg/ml de lípidos). Se desarrollaron nanoliposomas enriquecidos en GA, lo que permite la incorporación de manera sencilla de ligandos azucarados exhibidos en su superficie. Esto permitiría realizar un targeting a macrófagos de agentes anti-inflamatorios como glucocorticoides, vía RM.