Desarrollo de nanovesículas pH sensibles para el delivery pulmonar de Pirfenidona

CAPUTO, EZEQUIEL; MORILLA MARÍA JOSE; ALTUBE, MARIA JULIA; ROMERO, EDER LILIA

CABA

Jornada; Jobion Cuarta Edición; 2022

La fibrosis pulmonar es una afección que ocasiona la cicatrización progresiva del tejido pulmonar,conduciendo a la perdida de su función y la dificultad para respirar de los pacientes. La enfermedad tiene como característica principal una acumulación de células pulmonares mesenquimales en la región epitelial del pulmón, ocasionando la sobreproducción de matriz extracelular (MEC). Esta afección es crónica y no tiene cura, presentándose una supervivencia media post diagnóstico de 3 a 5 años. Uno de los dos fármacos aprobados hasta el momento es la pirfenidona (PFD), esta droga presenta actividad antiinflamatoria, antioxidante y antifibrótica, generando la modulación de diferentes factores de crecimiento y citoquinas. Pero debido a su administración sistémica la PFD debe usarse en concentraciones muy elevadas y ocasiona una gran cantidad de efectos adversos.En este trabajo se busca estudiar la administración por vía respiratoria de nanovesículas pH sensibles cargadas con PFD y bacterioruberina (BR), carotenoide con capacidad antioxidante. La matriz lipídica estará compuesta por lípidos del arquea hiperhalofila Halorubrum tebenquichense que otorgan estabilidad estructural al almacenamiento y que al ser ligandos naturales de receptores scavenger facilitan la endocitosis. La matriz también estará compuesta por dioleilfosfatidiletanolamina (DOPE) y colesterol hemisuccinato (CHEMS), lípidos que al disminuir el pH del medio pueden fusionarse con las membranas endosomales y liberar el contenido interno de las nanovesículas al citoplasma celular. Mediante la resuspensión del film lipídico se prepararon las nanovesículas pH sensibles con PFD que luego de ser extruidas presentaron un tamaño de 208,2 nm, pdi 0,228 y potencial Z de -27,4 mV. Las concentraciones de BR y PFD encapsuladas fueron de 3,23 µg/mg de lípidos y 2,15 µg/mg de lípidos respectivamente. Mediante la marcación de las muestras con la sonda Laurdan se obtuvieron indicios de que la PFD se encuentra en la membrana, ya que se genera una diferencia en la fluidez de la misma respecto de controles sin el fármaco. Se comprobó, mediante la encapsulación de HPTS y DPX en el interior acuoso, que las nanovesículas logran desestabilizarse y liberar su contenido a medida que disminuye el pH del medio, las formulaciones presentan a pH 7,4 una ruptura menor al 10%, cercana al 50% a pH 5 y del 70% a pH 4,5. Estos resultados muestran que los arqueolípidos, la BR y la PFD no limitan la pH sensibilidad del DOPE y el CHEMS. Luego de la nebulización de las muestras el tamaño de las nanovesículas mostró un incremento de 347,7 nm, pdi 0,505. Las formulaciones obtenidas logran incorporar en su membrana los compuestos antifibróticos sin alterar su sensibilidad a la disminución del pH.