Actividad antiviral de la dehidroepiandrosterona (DHEA) y moduladores de MAPK frente a virus con genoma a RNA y DNA

TORRES NI; CASTILLA V; WACHSMAN MB

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología, III Simposio Argentino de Virología Clínica y III Encuentro Latinoamericano de Virólogos 2011; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Los virus han adquirido la capacidad de manipular los sistemas de señalización de la célula, permitiéndoles regular su replicación y la respuesta del huésped. Dentro de estas vías, la de Raf/MEK/ERK es una de las más importantes. La dehidroepiandrosterona (DHEA) es una de las hormonas esteroidales más abundantes en el torrente sanguíneo. Presenta una gran variedad de actividades biológicas tales como: actividad antitumoral y antienvejecimiento, prevención de la diabetes y del estrés, actividad antiviral y modulación de ciertas vías de transducción de señales. La anisomicina es un antibiótico natural que, en bajas concentraciones, es también un potente activador de la vía de Raf/MEK/ERK. Por otro lado, el UO126 es un inhibidor especifico de MEK. En este trabajo, para dilucidar la relación entre la actividad antiherpética de DHEA, su rol modulador del camino de señalización de Raf/MEK/ERK y su mecanismo antiviral; hemos estudiado la acción de DHEA, UO126 y anisomicina sobre esta vía de señalización. También determinamos el efecto de estos compuestos sobre la multiplicación de herpes simplex tipo 1 (HSV-1), el virus del sarampión (MV), el virus dengue (DENV) y poliovirus (PV). Luego de la infección con HSV-1, se analizó por Western Blot la fosforilación de ERK. Los resultados indican que los eventos tempranos de la infección estimulan la fosforilación de ERK. Asimismo, el tratamiento con DHEA y anisomicina también aumenta la fosforilación de ERK, mientras que UO126 la reduce. Para caracterizar la actividad antiviral de DHEA, se realizó un experimento de agregado del compuesto a distintos tiempos. Sorprendentemente, cuando DHEA fue añadida 6 hs antes de la infección, y no mantenida durante la misma, se encontró un incremento de 1 log en el titulo del virus extracelular, probablemente debido a que la activación de la vía de Raf/MEK/ERK favorece la replicación del virus. Sin embargo, cuando DHEA se agregó después de la infección, produjo una inhibición mayor del titulo viral extracelular que del total, sugiriendo que DHEA podría estar afectando la formación y liberación de partículas infecciosas y que su actividad antiviral es independiente de su rol modulador de la vía de Raf/MEK/ERK. Para investigar el efecto de los compuestos sobre la expresión de proteínas de HSV-1, se realizó un ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI). DHEA y UO126 redujeron el número de células infectadas en un 92,8% y 95,9%, respectivamente. A su vez, ambos compuestos redujeron drásticamente el efecto citopático causado por la infección viral. Dado los resultados satisfactorios obtenidos con HSV-1, se analizó el efecto de DHEA, anisomicina y UO126 sobre la multiplicación MV, DENV y PV. DHEA y UO126 inhibieron la multiplicación de los virus ensayados de manera dosis dependiente; mientras que anisomicina inhibió solo la multiplicación de DENV en un 98%. El análisis por IFI mostró que UO126 y DHEA redujeron la infección y el efecto citopático de células infectadas con MV y DENV.