Tecnologías BacMam en células y animales; avances hacia el transporte de ADN en mamíferos

SIMONIN JA; GIMÉNEZ, CARLOS SEBASTIÁN; NÚÑEZ PEDROZO CRISTIAN NAHUEL; OLEA FERNANDA DANIELA; CROTTOGINI ALBERTO; GHIRINGHELLI D; BELAICH MARIANO NICOLÁS

Cordoba

Congreso; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2018

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus se caracterizan por poseer genomas grandes de ADN circular doble cadena y por infectar lepidópteros, himenópteros y dípteros. En los últimos tiempos se ha observado que además son capaces de transducir de manera eficiente células de mamíferos, manteniéndose como episomas no replicativos dentro del núcleo celular, lo que ha dado lugar a las tecnologías BacMam (baculovirus empleados en mamíferos). En tal sentido, por tolerar grandes cantidades de ADN exógeno, y por no ser virus infectivos en humanos, han adquirido gran interés para su uso como vectores de terapia génica. En este contexto, nos propusimos desarrollar y evaluar baculovirus AcMNPV recombinantes (basados en el sistema comercial Bac to Bac), tanto en células cultivadas in vitro como en modelos animales. Así, se desarrollaron 3 virus que expresan cada uno una proteína fluorescente diferente (eGFP, mCherry y BFP) bajo el promotor viral CMV. Utilizando estos virus, se midió la eficiencia de transducción empleando distintas multiplicidades de infección (MOI) sobre distintas líneas celulares y cultivos primarios de células mamífero, las cuales fueron analizadas mediante microscopia de fluorescencia y conteo de células por citometría de flujo. Empleando los resultados anteriores, se realizaron luego ensayos in vivo en conejos con isquemia de la arteria periférica (PAD).En paralelo, y con el fin de elongar la duración de la expresión de los genes recombinantes in vivo, también se comenzó a desarrollar un virus recombinante conteniendo un circuito génico que permite, de manera inducible, la liberación de un minicírculo gracias a la tecnología Cre/LoxP. Esta herramienta permitirá la expresión más controlable y duradera del gen de interés utilizando el sistema TetON/TetOFF.Hasta el momento, contamos con resultados preliminares in vitro, que han mostrado un correcto funcionamiento.En síntesis, las evaluaciones realizadas in vitro e in vivo sobre mamíferos empleando los baculovirus recombinantes generados en este trabajo mostraron resultados satisfactorios, los cuales son necesarios para proseguir con las evaluaciones preclínicas de ingredientes activos de terapia génica