Cardiomiocitos ovinos adultos muestran expresión incrementada del regulador negativo del ciclo celular Meis1, un posible blanco de terapia génica para la regeneración cardíaca.

LOCATELLI P.; GIMÉNEZ CS.; OLEA FD; BAUZÁ MR; URANGA VEGA M; CUNIBERTI L; GHIRINGHELLI D; CROTTOGINI A; BELAICH M

La Plata

Congreso; Congreso de la SAFIS; 2016

Sociedad Argentina de Fisiologia

Objetivos: El factor de transcripción meis1 posee un rol en la regulación del ciclo celular del cardiomiocito adulto. En ratones, meis1 genera el arresto del ciclo celular por medio de interacciones con proteínas inhibitorias del mismo (p15, p16, p19, p21). Recientemente se demostró que la disminución de su expresión es un estímulo mitogénico para cardiomiocitos postnatales. Por lo tanto, la inhibición de meis representaría un blanco potencial para terapias de regeneración cardíaca.Nuestro objetivo fue comparar niveles de expresión de meis1 y otros genes de ciclo celular en cardiomiocitos ovinos adultos de fetos de menos de 100 días de gestación (cardiomiocitos mitóticos) y fetos de más de 100 días de gestación (cardiomiocitos post-mitóticos).Materiales y métodos: Se diseñaron cebadores para amplificar fragmentos de los genes meis 1, cdkn1a, cdkn2aip, cdk2, cdk4, cdk6, ciclina E1, ciclina D2 y gapdh utilizando para su diseño la intersección de exones para detectar solamente RNAm. Se realizaron RT-PCR de punto final a partir de RNA extraído de miocardio de ovinos adultos. Los productos de PCR fueron recuperados y clonados dentro de plásmidos genéricos. Los insertos dentro de los plásmidos, cada uno conteniendo fragmentos de los genes seleccionados, fueron confirmados por secuenciación, y utilizados como calibradores de PCR en tiempo real (qPCR). A partir de RNAm obtenido de fetos de edad gestacional 100 días (n=4) se realizó RT-qPCR para obtener cuantificación absoluta de la expresión de los genes de interés y compararlos posteriormente con cardiomiocitos adultos. La expresión se muestra como expresión absoluta del gen objetivo/expresión absoluta de GAPDH. Análisis estadístico: Anova-Bonferroni, significación: p 100 dias de gestación (meis1/gapdh: 0,510,03) respecto a los fetos de