Cultivo de cardiomioblastos ovinos y murinos sobre macrófagos peritoneales activados

SEPULVEDA D; OLEA D; LOCATELLI P; IGUAÍN P; CROTTOGINI A; LAGUENS R

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LV Reunión Anual de la SAIC, Reunión de la SAFIS, XLII Reunión de la SAFE; 2010

Sociedad Argentina de Fisiología

La terapéutica celular con progenitores indiferenciados residentes en el corazón adulto representa una de las modalidades en desarrollo para el tratamiento de cardiopatías humanas. El desarrollo ?in vitro? de estas células demanda por lo menos varias semanas y requiere el empleo de matrices de adhesión y numerosos factores de crecimiento. Ello implica, además de un elevado costo, la imposibilidad de realizar terapia celular autóloga en corto tiempo, restringiendo su uso a situaciones crónicas. Dado que los macrófagos activados segregan numerosos factores de crecimiento, se decidió cultivar células cardiacas o fragmentos de corazón sobre una monocapa de macrófagos peritoneales activados, con el fin de indagar si este procedimiento era eficiente para la obtención de cardiomioblastos. Se obtuvieron macrófagos peritoneales murinos activados por la inyección ip de tioglicolato. Después de su adhesión espontánea en placas plásticas se cultivaron con DMEM y 20% SBF. Tres días después se incorporaron células cardiacas adultas murinas u ovinas obtenidas por digestión con colagenasa, o fragmentos de corazón. A los 7 días se observó el crecimiento de una monocapa de células cuadrangulares y de esferas, de las que se obtuvieron líneas celulares. El estudio inmunohistoquímico mostró que las esferas estaban formadas por una población heterogénea de células ?stem? (sca y c-kit positivas), musculares lisas, endoteliales y cardiacas). Las células de las monocapas, y de las líneas celulares obtenidas de las monocapas o de las esferas, mostraron marcadores de músculo liso y cardíaco (actina de músculo liso, actina sarcomérica, desmina y conexina 43). Los resultados fueron similares con corazones de oveja o de ratón. Nuestros resultados indican que el empleo de macrófagos activados permite cultivar células del corazón adulto con capacidad de diferenciarse en músculo cardiaco y liso en un tiempo relativamente corto y sin el empleo de factores de crecimiento o matrices de adhesión.