Aislamiento, identificación, modificación genética y rastreo de células mesenquimales de tejido adiposo de conejo para su uso en modelos de enfermedad vascular periférica.

OLEA FD; LOCATELLI P; HNATIUK A; SEPULVEDA D; RAMIREZ R; PEREZ SAEZ JM; BERCOVICH A; CROTTOGINI A

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la SAIC, Reunión de la SAFIS y AACYTAL; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Las células mesenquimales de tejido adiposo (ASCs) han demostrado tener efectos beneficiosos en modelos de enfermedades cardiovasculares por liberación de factores de crecimiento, entre ellos VEGF. Por otra parte, hemos demostrado que la administración de un plásmido que contiene el gen de VEGF (pVEGF165) en conejos con enfermedad vascular periférica (EVP) induce angio-arteriogénesis disminuyendo las lesiones musculares. Por lo tanto, la utilización de ASCs transfectadas con pVEGF165 podría tener efectos terapéuticos aun más beneficiosos. Como primer paso, nuestro objetivo fue aislar, identificar y transfectar con pVEGF165 ASCs de conejos y luego rastrear su permanencia in vivo a diferentes tiempos post-inyección. Células adherentes provenientes de la digestión de grasa inguinal fueron expandidas hasta pasaje 4. Éstas fueron sometidas a citometría de flujo con anticuerpos anti-CD44, CD90, CD105, CD45, a ensayos de diferenciación celular a osteocitos y condrocitos, y a ensayos de transfección con diversas cantidades de lipofectamina 2000 y plásmidos que contienen GFP, luciferasa y VEGF165. En 2 conejos en los que se indujo EVP por extirpación de la arteria femoral izquierda se inyectó 1107 ASCs teñidas con PKH26 en el músculo isquémico y se tomaron biopsias a 7, 15 y 30 días para rastrear las células inyectadas. Las ASCs fueron exitosamente aisladas, expandidas e identificadas como mesenquimales por su perfil inmunológico (CD44+, CD90+, CD105+, CD34- y CD45-) y por su diferenciación a osteocitos y condrocitos. La eficiencia de transfección máxima (10%) se logró con 3 μl de lipofectamina 2000/μg de plásmido/4 cm2. Las ASCs marcadas fueron localizadas en el músculo isquémico a los 7, 15 y 30 días post-inyección. Las ASCs de conejo pueden ser satisfactoriamente identificadas, replicadas y transfectadas, y persisten viables a largo plazo en músculo isquémico. Sin embargo, la eficiencia de transfección deberá ser optimizada.