Expresión de TIM3 en Macrófagos Infiltrantes de Tumores en Modelos Murinos de Xenotransplantes de Cáncer Anaplásico de Tiroides

PALACIOS, LUZ MARIA; VIANO, ESTEFANIA; GEYSELS ROMINA; CHOCOBAR, YAIR; PELLIZAS, CLAUDIA GABRIELA; NICOLA, JUAN PABLO; MOTRAN, CLAUDIA CRISTINA; RODRÍGUEZ GALÁN, MARÍA CECILIA; FOZZATTI, LAURA

Rosario

Congreso; XIV Congreso de la Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología (FASEN); 2022

Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología (FASEN)

Introducción y Objetivos El cáncer anaplásico de tiroides (ATC) es el subtipo de cáncer de tiroides más agresivo. Actualmente, las terapias efectivas para el grupo de pacientes con ATC son limitadas. Para estos carcinomas avanzados, es clara la necesidad de identificar nuevos mediadores que puedan contribuir al desarrollo de novedosas alternativas terapéuticas. Los macrófagos (Mo) constituyen el mayor componente del microambiente tumoral (TME). Estas células presentan distintos estados funcionales siendo los Mo anti-tumorales o M1 y los pro-tumorales o M2 los extremos opuestos de un espectro continuo de características fenotípicas. Dentro del TME, los Mo presentan un fenotipo principalmente M2 pro-tumoral. Curiosamente, en pacientes con ATC se observa un aumento en la densidad de estas células del sistema inmune y su presencia se correlaciona además con un incremento en el tamaño tumoral y disminución de la sobrevida. Por lo tanto, los Mo podrían representar un blanco terapéutico prometedor para el tratamiento de estos pacientes.Estudios previos de nuestro grupo demostraron la reprogramacion fenotipica y funcional de celulas THP-1 (monocitos humanos) hacia un perfil esencialmente M2 pro-tumoral luego del tratamiento con medios condicionados de células de ATC. Evidenciamos que estos efectos fueron mediados por la modulación de la expresión de la proteína checkpoint inhibitoria TIM3 (T cell immunoglobulin and mucin-domain containing protein-3). Con la finalidad de corroborar y extrapolar nuestras observaciones in vitro, el objetivo de nuestro trabajo fue caracterizar la expresión de TIM3 en Mo en el infiltrado tumoral in vivo.Materiales y Métodos Se generaron modelos de xenotrasplante de ATC en ratones SCID-NOD, mediante la inoculación subcutánea de las líneas celulares derivadas de ATC humano, 8505c y C643. El infiltrado leucocitario tumoral (TIL), caracterizado por la expresión del marcador CD45, se analizó mediante citometría de flujo. Los niveles de expresión de TIM3 en los tumores se analizaron mediante ensayos de RT-PCR e inmunofluorescencia. Los perfiles de expresión génica se obtuvieron de la base de datos NCBI Gene Expression Omnibus y posteriormente se realizó el análisis bioinformático correspondiente.Resultados Evidenciamos ~15% de TILs en los xenotransplantes derivados de células 8505C y ~30% en los xenotransplantes derivados de células C643. La infiltración de Mo en los tumores se evaluó a través de los marcadores F4/80 y CD11b, y se determinó que un ~20% de las células CD45 fueron F4/80 CD11b. Además, se evaluó el fenotipo de diferenciación de los Mo infiltrantes del TME en ambos tipos de tumores de ATC, evidenciándose que ~40% de estos mostraron un fenotipo pro-tumoral compatible con M2, utilizando los marcadores CD206 y Arginasa 1 y Óxido Nítrico Sintasa inducible (Mo M1). La expresión proteica y de ARNm de TIM3 fue detectada en tejidos derivados de xenotrasplantes de ATC. Posteriormente, evaluamos la expresión de TIM3 en Mo infiltrantes de tumores. Encontramos que ~35% de las células CD45 F4/80 CD11b fueron además positivas para esta proteína en los xenotransplantes derivados de ATC, revelando la expresión de TIM3 en macrófagos infiltrantes de tumores. Finalmente evaluamos la relevancia clínica de nuestros hallazgos mediante estudios transcriptomicos, y evidenciamos que la expresión de TIM3 fue significativamente mayor en tejidos de ATC humanos en comparación con tejidos tiroideos normales.Conclusiones Nuestros resultados revelan, por primera vez, la expresión de TIM3 en Mo infiltrantes en los tumores de xenotransplantes derivados de células humanas de ATC, validando nuestras observaciones previas in vitro. Esta evidencia sugiere que TIM3 en Mo puede representar un potencial blanco de intervención terapéutico para el tratamiento de pacientes con ATC.