Caracterización de TcTASV-B, proteínas de la familia TcTASV de Trypanosoma cruzi

RIZZI MARIANA; FLORIDIA, NOELIA; LEVY, GABRIELA; SANCHEZ, DANIEL; TEKIEL, VALERIA

Congreso; XXVII Reunión Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

La familia de proteínas de superficie TcTASV compuesta por aproximadamente 40 miembros, no posee ortólogos en otros organismos y está conservada en diferentes linajes del parásito. De acuerdo a la longitud, secuencia y motivos de la región central de los productos proteicos se definen 4 subfamilias (TcTASV-A, B, C y W). La familia TcTASV-C se expresa en la superficie de tripomastigotes y se secreta mientras que la subfamilia A fue detectada en el citoplasma de tripomastigotes y amastigotes. Sin embargo, desconocemos el patrón de expresión de las subfamilias B y W. El objetivo de este trabajo fue caracterizar patrón de expresión y localización de la subfamilia TcTASV-B. Para esto, el gen TcCLB.511877.10 (aa 35 a 224) fue clonado en el vector pGEX fusionado a GST. Se indujo su expresión y se purificó la proteína recombinante, que se utilizó para inmunizar ratones y obtener sueros hiperinmunes anti-TcTASV-B. Para determinar el estadio de expresión de la proteína en T. cruzi y el peso molecular se realizaron ensayos de Western Blot sobre extractos de epimastigotes, tripomastigotes y amastigotes. También se realizaron IFIs para localizar TcTASV-B según el estadío. Se determinó que TcTASV-B se expresa principalmente en amastigotes extracelulares y en tripomastigotes. No se detectó expresión en amastigotes intracelulares ni en epimastigotes. La localización de TcTASV-B en la membrana del parásito parece estar restringida a una región particular y no distribuída en toda la superficie. Por medio de programas de predicción determinamos que TcTASV-B estaría glicosilada y fosforilada y posee un péptido señal y secuencia para adición de ancla GPI. Estos resultados, conjuntamente con los obtenidos para TcTASV-C y A, sugieren que las diferentes subfamilias presentan patrones de expresión diferencial (estadio y localización) y estimulan el estudio de los mecanismos involucrados en estos procesos.