Estandarización de un protocolo de extracción de ADN para la amplificación de regiones ITS-1 para la caracterización molecular de Culicoides insignis (Diptera: Ceratopogonidae) en la Ciudad de Posadas, Misiones

AYALA MAHIA MARIEL; WALANTUS, LEONARDO HORACIO; ZAPATA, PEDRO DARÍO

San Carlos de Bariloche

Congreso; VIII Congreso Argentino de Entomología; 2012

SOCIEDAD ENTOMOLOGICA ARGENTINA

De los 102 géneros vivientes que conforman la familia Ceratopogonidae (Diptera:Nematócera), las hembras de sólo cuatro de ellos presentan hábitos hemátofagos:Austroconops Wirth & Lee, Leptoconops Skuse, Forcypomyia Meigen (SubgéneroLasiohelea Kieffer) y Culicoides Latreille. Este último es particularmente importantedesde el punto de vista sanitario, y es el numéricamente mejor representado. EnArgentina, sus especies son conocidas vulgarmente como “jejenes”, “polvorines” o“mbarigui mini”. La importancia sanitaria principal en cuanto al rol como vector de losCulicoides radica en los problemas ocasionados por el Virus de la Lengua Azul (BTV),enfermedad que ataca principalmente a rumiantes. En la región Neotropical la especiesospechada de comportarse como vector del BTV es Culicoides insignis Lutz. Eldesarrollo de un método molecular basado en la PCR utilizando primers específicosofrece una posibilidad de simplificar el proceso de identificación de especiespertenecientes a este género. Al aplicar distintas combinaciones para la extracción delADN, se observó que los mejores resultados se obtuvieron con el agregado al Buffer deLisis de SDS 2%, CTAB 2% y Proteinasa K para la disrupción celular. En la purificacióndel ADN y remoción de proteínas los resultados más óptimos se obtienen con el métodoque combina una extracción con solventes orgánicos y precipitación salina. Este métodopermitió la amplificación de una región de 380 pb correspondiente a una porción del ITS-1 mediante cebadores específicos para el género utilizando 30 ciclos de amplificación auna temperatura de hibridación de 58°C.