Cromatografía líquida con columna corta y detector de arreglo de diodos en la determinación simultánea de vitaminas hidrosolubles en suplementos dietarios

MARÍA M. DE ZAN; CARLA M. TEGLIA; YAMILE S. CARO; JUAN C. ROBLES

Bahía Blanca

Congreso; 5º Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Universidad Nacional del Sur

En el tratamiento de alteraciones nutricionales o desnutrición en niños y adultos se utilizan frecuentemente suplementos dietarios que se administran como alimentos bebibles. Estos son una importante fuente de vitaminas lipo e hidrosolubles, fundamentales en la recuperación del paciente. La composición del alimento y las condiciones de conservación del mismo son condicionantes de la estabilidad de las vitaminas en la preparación. El desarrollo de métodos analíticos sencillos, rápidos y confiables para la determinación del contenido de vitaminas es de gran importancia para el control rutinario de estas preparaciones en su etapa de elaboración y a lo largo de su vida útil.Utilizando una columna  ZORBAX Eclipse XDB-C18 de 4.6 x 75 mm con partículas de 3.5 µm de diámetro, una fase móvil compuesta por un buffer de fosfato diácido de potasio 25 mM a pH 2.50 y acetonitrilo con gradiente de elusión a flujo 1 ml min-1 a 25ºC y detección a múltiples longitudes de onda; se desarrolló un método cromatográfico para separar y cuantificar simultáneamente las vitaminas hidrosolubles tiamina (B1), riboflavina (B2), niacinamida  (B3), ácido pantoténico (B5), piridoxina (B6), biotina (B8), ácido fólico (B9), cianocobalamina (B12) y ácido ascórbico (C). Todas las vitaminas eluyeron en soluciones estándar antes de los 10 minutos de corrida siendo la menor resolución entre ellas de 2.0 (tiamina-ascórbico). Las longitudes de onda de trabajo que se utilizaron para la calibración fueron 195 nm para B5 y B8, 245 nm para B1 y C, 260 nm para B2 y B3, 280 nm para B6 y B9, y 360 nm para B12. Las curvas de calibración obtenidas para 6 niveles de concentración fueron lineales en el rango de trabajo seleccionado, cumpliéndose para todas las vitaminas la prueba F de linealidad para un 95% de confianza y coeficientes de regresión superiores a 0.995. El procedimiento de preparación de la muestra se llevó a cabo protegiéndola en todo momento de la luz y consistió en una extracción acuosa a partir de 2 g del alimento que se sonicaron con el buffer de la fase móvil durante 10 minutos y se llevaron a volumen en matraz de color caramelo. La especificidad del método se verificó mediante el estudio de la pureza de pico de los analitos en la muestra y su comparación con los espectros de los respectivos estándares. Los ensayos de precisión y exactitud se llevaron a cabo sobre muestras comerciales y muestras fortificadas.