Desarrollo, optimización y validación de un método por cromatografía líquida con apareamiento iónico para la determinación de nicarbazina en preparaciones de uso veterinario

CARLA M. TEGLIA; JUAN C. ROBLES; MARÍA M. DE ZAN; MARÍA S. CÁMARA

Bahía Blanca

Congreso; 5º Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Universidad Nacional del Sur

La nicarbazina (NICA) es un antibiótico coccidiostático utilizado en aplicaciones veterinarias tanto para tratamiento de infecciones o como profiláctico o promotor de crecimiento para aves y otros animales de corral. Este fármaco es una mezcla equimolecular de 4-4`dinitrocarbanilida (DNC) y 2-hidroxi-4,6-dimetilpirimidina (HDP). Los métodos cromatográficos descritos para la determinación de este antibiótico valoran sólo uno de los compuestos, el DNC, ya que la basicidad y alta polaridad del HDP dificultan su separación eficiente en fase reversa. El método desarrollado utiliza un agente de apareamiento iónico en la fase móvil, el heptanosulfonato de sodio (HSS), que permite una adecuada separación de ambos compuestos y su cuantificación a una longitud de onda de 300 nm, mediante un gradiente de elusión con acetonitrilo, en una columna Inerstil ODS-3 4,6 x 150 mm y partículas de 5 µm de diámetro (GL Science). Cuatro de los parámetros del método cromatográfico (temperatura del horno de columna, pH, concentración de acetato de sodio y de HSS en la fase móvil) se estudiaron mediante un diseño central compuesto con tres niveles para cada factor a los fines de optimizar los tiempos de retención, anchos de pico, resolución, y área de los dos compuestos, como también la cantidad de picos secundarios. Mediante el método quimiométrico de la Superficie de Respuesta se obtuvo un modelo de regresión que arrojó como valores óptimos de las variables: fase móvil compuesta por buffer HSS 12.6 mM y acetato de sodio 3.6 mM pH 2.8 y temperatura de columna 22.5 ºC. El método cromatográfico se aplicó a la determinación de nicarbazina tanto en materias primas, como en preparaciones de uso veterinario con contenidos de 8-25 % p/p de NICA junto con excipientes y otros principios activos. Se evaluaron distintos procedimientos para el pretratamiento y extracción de las muestras. El método desarrollado se sometió a un proceso de validación para los parámetros de selectividad, linealidad, rango,l ímites de detección y cuantificación, precisión y recuperación, siguiendo los lineamientos de la ICH y teniendo en cuenta las distintas matrices empleadas, determinándose que el mismo es apto para el fin propuesto.