Desarrollo y validación de un método por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR) para la determinación de metotrexato en plasma

TEGLIA, CARLA MARIELA; CARO, YAMILE SOLEDAD; DE ZAN, MARÍA MERCEDES; ROBLES, JUAN CARLOS

Santa Fe

Congreso; 6º Congreso argentino de Química Analítica; 2011

Universidad Nacional del Litoral

El metotrexato (MTX) en una droga citotóxica que ha sido usada desde 1940 en el tratamiento de tumores y leucemias y actualmente se utiliza también como agente inmunosupresor en el transplante de órganos. Debido a su alta toxicidad, el dosaje plasmático de MTX está incluido en las pautas de control de tratamientos quimioterapéuticos de numerosas neoplasias. La toxicidad de MTX es dependiente de la concentración y del tiempo de exposición, siendo imprescindible un tratamiento de rescate si el paciente no logra metabolizar la droga en un tiempo adecuado. Utilizando una columna ZORBAX Eclipse XDB-C18 de 4.6 x 150 mm con partículas de 5 µm de diámetro, una fase móvil compuesta por buffer de acetato de sodio 25.0 mM a pH 3.50, metanol y acetonitrilo con gradiente de elusión y flujo 1.5 mL min-1 a 25 ºC y detección a 305 nm; se desarrolló un método cromatográfico capaz de cuantificar MTX en plasma durante el tratamiento, en un tiempo total de análisis de 17 minutos (incluyendo el pretratamiento de muestra que consistió en desproteinización del plasma heparinizado con acetonitrilo y una microextracción líquido-líquido con cloroformo). La curva de calibración obtenida en plasma por triplicado para 8 niveles de concentración fue lineal en el rango de analizado (0.10 µM a 5.0 µM), obteniéndose un p-valor para falta de ajuste de 0.113. Se obtuvo un LOD: 0.062 µM y un LOQ: 0.17 µM. La especificidad del método se demostró mediante el estudio de interferencias producidas por la matriz, uno de sus metabolitos principales (7 OH-MTX), la hemólisis y la medicación concominante: leucovorina, dexametasona, ácido fólico, vincristina y mercaptopurina. En los ensayos de precisión y exactitud se obtuvieron CV < 15% y recuperaciones dentro del ± 15% del valor nominal en todos los niveles, aun bajo el efecto de dilución del plasma. Estos valores mejoran las recuperaciones obtenidas por Sima Sadray , que varian en ± 30% del valor nominal y cumplen los criterios establecidos por EMEA.