Desarrollo de Método de Cromatografía de Alta Performance para la Determinación de Ácido Retinoico en plasma de Anfibios y Reptiles

CARLA M. TEGLIA; HÉCTOR C. GOICOECHEA; SERGIO NARETTO; ANDRÉS ATTADEMO; MARGARITA CHIARAVIGLIO; PAOLA M. PELTZER; RAFAEL C. LAJMANOVICH

Mendoza

Congreso; 7º Congreso Argentino Química Analítica; 2013

Desarrollo de método de cromatografía de alta performance para la determinación de Ácido Retinoico en plasma de anfibios y reptiles. Teglia C. M.1 , Goicoechea H.C., Naretto S., Attademo A.M., Chiaraviglio M., Peltzer P.M., Lajmanovich R.C. 1 Cátedra de Química Analítica, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del Litoral (FBCB-UNL-CONICET). Paraje El Pozo s/n, (3000) Santa Fe, Argentina El Ácido Retinoico (RA) y sus isómeros son derivados de la vitamina A y juegan un papel importante en varios procesos biológicos esenciales, incluyendo la visión, la reproducción, el desarrollo embrionario de los vertebrados, el crecimiento, la diferenciación, el desarrollo de los huesos, y el mantenimiento de la salud general del organismo [1]. El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un método cromatográfico para la caracterización de los niveles plasmáticos básales de RA en anfibios y reptiles, teniendo como guía el trabajo descripto por Béruvé V. E. y colaboradores [2]. Las muestras fueron tomadas por punción cardíaca en anfibios (Leptodactylus chaquensis N = 28 y L. latrans N = 7) y caudal en reptiles (Tupinambis merianae N = 12 y T. rufescens N = 5). Los analitos se extrajeron del plasma mediante extracción líquido-líquido. Para optimizar las condiciones cromatográficas se realizó un diseño experimental, eligiendo la metodología de Superficie de Respuesta para tal fin. La optimización se realizó utilizando una columna ZORBAX Eclipse XDB-C18 de 4.6 x 75 mm con partículas de 3.5 µm de diámetro. Las condiciones óptimas dieron como resultado una fase móvil compuesta por solución ácida (ácido acético al 2 %, más tetrahidrofurano al 5 %):Metanol:Acetonitrilo (16:83.4:0.6), flujo 0.68 mL min-1 a 37.1ºC y detección a 350 nm. La curva de calibrado obtenida en plasma por triplicado para 8 niveles de concentración fue lineal en el rango analizado (0.05 ? 2.42 µg/mL). En los ensayos de precisión se obtuvieron valores de: nivel 1: 10.2 %; 3: 4.4 %; 6: 7.0 % y 7: 6.1 % para el día 1 y de nivel 1: 9.6 %; 3: 4.9 %; 6: 7.0 % y 7: 3.1 % para el día 2. En el ensayo de exactitud se obtuvieron recuperaciones del: nivel 1: 111.6 %; 3: 108.7 %; 6: 93.1 % y 7: 94.6 %. En todos los casos se obtuvieron CV