Evaluación de la expresión de TGF-B1 bajo la influencia de ACTH durante el periodo preovulatorio en bovinos.

PEUST, CARLA; BARALE, JULIANO; AMWEG, A.; SALVETTI, N.R.; ORTEGA H. H.; MATILLER V.; HEIN G.

Esperanza, Santa Fe

Jornada; . V Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2017

FCV UNL

La superfamilia del factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) está compuesta por proteínas multifuncionales. Ciertos miembros se expresan en el folículo ovárico, tanto en el ovocito como en las células somáticas que lo acompañan, ejerciendo una acción regulatoria autocrina y paracrina vinculada a la maduración folicular. En estudios previos hemos observado que la expresión de las isoformas TGF-β1, 2 y 3, se encuentra alterada en animales con enfermedad quística ovárica (COD) y puede tener un rol importante en patogénesis de la enfermedad1.Las vacas lecheras de alta producción se encuentran expuestas a períodos de estrés a lo largo de las etapas productivas y reproductivas. Además, la activación del eje hipotálamo-hipofisario-adrenal puede provocar trastornos a nivel reproductivo a través de las acciones de la ACTH y el cortisol, afectando la secreción de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH). Trabajos previos de nuestro grupo han demostrado que la pared folicular bovina es capaz de responder frente al estímulo de ACTH con cambios en la secreción de esteroides, incluyendo una mayor liberación de cortisol, lo que sugiere que este último posee un rol local en la patogenia de la COD y en la función ovárica en bovinos2. Por lo anteriormente expuesto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión proteica del ligando TGF-β1 durante las diferentes etapas del desarrollo folicular en el ovario bovino, luego de la administración de ACTH durante el proestro.Se utilizaron 12 vacas de la raza Holando Argentino, sobre las que se efectúo el protocolo de presincronizacion G-6-G para luego realizar la administración de dos dosis separadas (12 h) de PGF2α a los 7 días de la última administración de GnRH3. Al momento de la primera administración de PGF2α los animales se dividieron en dos grupos: a) ACTH (n=6), tratadas con 100 UI de ACTH cada 12 h 4, y b) Control (n=6), tratadas con solución fisiológica cada 12 h. Para la obtención de los folículos preovulatorios se realizó la ovariectomía a las 36 h post-administración de PGF2α. Para la determinación de la expresión de TGF-β1 en las muestras obtenidas, se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta de acuerdo al protocolo descripto previamente por Matiller y col.1. La cuantificación se realizó mediante análisis digital de imágenes (% de área inmunomarcada). En ambos grupos se evaluaron las capas de la granulosa y de la teca interna de los folículos en crecimiento (primordiales, primarios, preantrales pequeños, preantrales grandes, antrales, antrales dominantes, atrésicos). Se corroboró la especificidad del anticuerpo por Western blot.Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el programa estadístico SPSS 11.0.1 para Windows. Se realizó un análisis de los datos obtenidos por inmunomarcación de los distintos tipos foliculares aplicando pruebas paramétricas para la comparación de las distintas categorías foliculares mediante la prueba t de Student. Los resultados se expresan como media ± desvío estándar (X ± DS).Los resultados mostraron una expresión citoplasmática de TGF-β1 en todas las categorías foliculares estudiadas, tanto en células de la granulosa como en teca interna. La expresión proteica de TGF-β1 en las células de la granulosa de folículos preantrales grandes de animales tratados fue mayor respecto al de los controles (p