Participación de la Foliculostatina en la patogenia de la Enfermedad Quística Ovárica en bovinos.

MATILLER V.; STANGAFERRO M.L.; DÍAZ P.; SILVA M.A.; REY F.; ORTEGA H; SALVETTI NR

Esperanza

Jornada; XII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas en Ciencias Veterinarias 2011.; 2011

Facultades de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Rosario y de la Universidad Nacional del Litoral.

Participación de la Foliculostatina en la patogenia de la Enfermedad Quística Ovárica en bovinos. 1Matiller V, 2Stangaferro ML, 1Díaz PU, 1Silva MA, 1 Rey F, 1 Ortega HH, 1Salvetti NR. 1Laboratorio de Biología Celular y Molecular. 2 Cátedra de Teriogenología. Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Litoral La Enfermedad Quística Ovárica es un desorden que puede afectar hasta un 15% de las vacas durante el período post-parto, prolongando el intervalo parto-concepción y provocando pérdidas significativas a la producción pecuaria en general (4). Los distintos integrantes de la superfamilia del Factor de Crecimiento Transformante-β (TGF-β) cumplen importantes roles en los mecanismos autócrinos, parácrinos y endócrinos del ovario (1). Dos importantes ligandos componentes de esta familia son la Activina y la Inhibina. Por otra parte, la Foliculostatina constituye una proteína de unión para estas proteínas, con una elevada afinidad por la Activina. La unión de la Activina con la Foliculostatina ocasiona la neutralización de sus efectos biológicos sobre la hipófisis (2). La Foliculostatina ha sido detectada desde estadíos tempranos del desarrollo folicular ovárico en las células de la granulosa junto con las subunidades βA y βB de Activina. Además se ha detectado un abrupto incremento en la relación Activina A/Foliculostatina en los folículos antrales bovinos en el momento en que estos alcanzan el tamaño en el cual opera el mecanismo de selección folicular dependiente de FSH. Por otro lado, al oponerse a los efectos de la Activina podría promover la luteinización y atresia folicular. Está demostrada la importancia de esta proteína en el funcionamiento normal del ovario. El presente trabajo se plantea como objetivo estudiar la expresión de foliculostatina en ovarios de bovinos con enfermedad quística ovárica. Se trabajó con secciones de ovarios bovinos: 1) Provenientes de frigoríficos y con alteraciones macroscópicas compatibles con la Enfermedad Quística Ovárica 2) con quistes inducidos mediante la administración de ACTH y 3) Controles provenientes de animales sanos. Los tejidos fueron fijados en formaldehído bufferado al 4% durante 8 hs a 4° C y procesados de acuerdo a técnicas histológicas de rutina hasta la inclusión en parafina. Luego se efectuaron cortes seriados de 4 µm de espesor sobre los que se realizó una técnica de inmunohistoquímica indirecta (3) para la determinación de Foliculostatina (anticuerpo primario policlonal, Abcam). Se utilizó un anticuerpo secundario biotinilado, luego estreptavidina peroxidasa, y finalmente la reacción fue revelada utilizando 3,3´diaminobencidina como cromógeno. El análisis digital se realizó mediante el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). Los parámetros cuantificados fueron evaluados mediante el programa SPSS 11.0.1 para Windows. Las diferencias entre los distintos estadios foliculares fueron detectadas mediante el test de Duncan. Se observó una notoria marcación citoplasmática en las células de la granulosa siendo menor en las células de la teca. Pudieron observarse diferencias significativas (p menor a 0.05) entre los estadíos foliculares y quistes, marcando una tendencia de aumento de marcación asociado al crecimiento folicular, encontrándose diferencias significativas entre folículos primarios (grupo control: 2,45+/- 0,64; Grupo con enfermedad: 3,09+/-1,15 ) y secundarios (grupo control: 4,74+/-1,34; grupo con enfermedad: 3,23+/-0,85) de ambos grupos en relación con terciarios de ambos grupos (grupo control:13,10+/-3,08; grupo con enfermedad:11,06+/-1,99) y quistes de frigorífico (15,60 +/-3,52; grupo con enfermedad). Los quistes inducidos demuestran una marcación menor que los quistes de frigorífico (5,25+/-0,33), siendo similar a la demostrada en los folículos secundarios. Las células de la granulosa de los quistes obtenidos en frigorífico mostraron el mayor porcentaje de expresión, esto lleva a pensar en un efecto inhibidor sobre el crecimiento de los demás folículos por parte del quiste. Considerando las múltiples funciones de la foliculostatina en el desarrollo folicular, la alteración en su expresión podría estar relacionada con los cambios que ocurren durante el desarrollo de los quistes foliculares. (1)Glister, C.; Groome, N.P.; Knight, P.G.Bovine follicle development is associated with divergent changes in activin-A, inhibin-A and follistatin and the relative abundance of different follistatin isoforms in follicular fluid. J Endocrinol 188:215-225, 2006. (2)Kumanov, P.; Nandipati, K.C.; Tomova, A.; Robeva, R.; Agarwal, A. Significance of inhibin in reproductive pathophysiology and current clinical applications. Reprod Biomed Online 10:786-812, 2005. (3)Salvetti NR, Stangaferro ML, Palomar MM, Alfaro NS, Rey F, Gimeno EJ, Ortega HH. Cell proliferation and survival mechanisms underlying the abnormal persistence of follicular cysts in bovines with cystic ovarian disease induced by ACTH. Anim Reprod Sci 122:98-110, 2010. (4)Silvia, W.J.; Alter, T.B.; Nugent, A.M.; Laranja da Fonseca, L.F. Ovarian follicular cysts in dairy cows: an abnormality in folliculogenesis. Domest Anim Endocrinol 23:167-177, 2002.