Especies de Leptospiras en aislamientos y muestras clínicas humanas, Argentina (2007-2013)

YOSENA CHIANI; MARÍA FERNANDA SCHMELING; PAULINA JACOB; NOELIA LANDOLT; CAROLINA CUDOS; VANINA VARNI; KARINA CAIMI; BIBIANA VANASCO

Buenos Aires

Congreso; 4° Encuentro Internacional Sobre Enfermedades Olvidadas y XV Simposio Sobre Control Epidemiológico de Enfermedades Transmitidas por Vectores, MUNDO SANO; 2013

Fundación MUNDO SANO

La leptospirosis es la enfermedad zoonótica más prevalente a nivel mundial. El cultivo es el patrón de oro para la confirmación de los casos y para conocer las variedades circulantes. Sin embargo, es muy lento y de difícil aplicación para el diagnóstico de la enfermedad, más aún en seres muestras provenientes de humanos, para el diagnóstico de la enfermedad. Debido a estas dificultades la epidemiología de la leptospirosis ha sido descripta utilizando el dato del serogrupo presuntamente infectante determinado por el Test de la Microaglutinación (MAT). Sin embargo, definir el serogrupo infectante presenta dificultades cuando existen reacciones cruzadas heterólogas o coaglutinación entre serogrupos y además pueden no ser detectados cuando la cepa infectante no está incluida en el cepario empleado. El conocimiento de las variedades prevalentes es esencial para comprender la epidemiología de la enfermedad en cada región y diseñar estrategias de prevención y control. Las vacunas disponibles en la actualidad sólo confieren dan protección frente al serovar presente en su composición y el desconocimiento de si no se conocen con certeza las variedades de leptospiras circulantes en cada región no disminuye su eficacia. se puede saber si serán efectivas o no. La secuenciación de un fragmento del gen rrs que codifica para el El método de 16S rRNA, permite identificar especies de leptospiras tanto de aislamientos cómo de muestras clínicas. El conocimiento de las variedades prevalentes es esencial para comprender la epidemiología de la enfermedad en cada región y diseñar estrategias de prevención y control. Las vacunas disponibles en la actualidad sólo dan protección frente al serovar presente en su composición y si no se conocen con certeza las variedades de leptospiras circulantes en cada región no se puede saber si serán efectivas o no. El objetivo de este estudio fue es la tipificación fenotípica y molecular de leptospiras a partir de aislamientos y muestras clínicas humanas mediante la caracterización del rRNA 16Ss rRNA. Se utilizaron aislamientos y muestras que fueron derivadas para diagnóstico de leptospirosis al Laboratorio Nacional de Referencia de Leptospirosis (INER ?E. CONI?) desde el año 2007 al 2013 y resultaron positivas mediante PCR en tiempo real detectable. Para identificar fenotípicamente los serogrupos se enfrentaron y titularon los aislamientos con antisueros de conejo hiperinmunes representativos de los 25 serogrupos. Se extrajo ADN de aislamientos y muestras clínicas para la tipificación molecular. Para la técnica de 16Ss rRNA, se amplificó por PCR un fragmento del gen la región comprendida entre los oligonucleótidos 38 a 368 de la estructura primaria del gen rrs (16s) de L. interrogans según Merien y col (1992) con modificaciones. Los productos de reacción purificados fueron secuenciados. Las secuencias obtenidas se alinearon utilizando ClustalX. Las secuencias ensambladas se compararon con la base ?Ribosomal data base Project? para la identificación de especie. Se relacionó la gravedad de los casos estudiados con la especie de Leptospira identificada analizando las historias clínicas. Se tipificaron 6 aislamientos por ambos métodos de tipificación y 49 muestras clínicas (45 sueros y 4 sangre con EDTA) sólo mediante 16Ss rRNA. Veintinueve de las 49 muestras clínicas y 1 de los 6 aislamientos, pertenecían a pacientes que fallecieron por leptospirosis. Dos aislamientos, obtenidos en el año 2012 y 2 del año 2013 , en la tipificación fenotípica resultaron comprendidos dentro del serogrupo Canicola. Si consideramos que en la actualidad la mayoría de los casos confirmados en el país presentan títulos co-aglutinantes a la MAT frente a Canicola e Icterohaemorragiae, el resultado hallado en este estudio podría indicar que la mayoría de los casos podrían atribuirse al serogrupo Canicola. Los 6 aislamientos y 28/49 (26 sueros y 2 sangre c/EDTA) fueron 16Ss rRNA positivos. En los aislamientos las especies de Leptospiras identificadas fueron L. interrogans (n=4), L. broomii (n=1) y L. wolffii (n=1). La especie L. interrogans agrupa a la mayoría de las leptospiras patógenas incluidas dentro de éstas por ejemplo algunas cepas de los serogrupos Canicola e Icterohaemorrhagiae. Sin embargo L. broomii y L. wolffii corresponden a leptospiras de patogenicidad intermedia o desconocida, y si lo relacionamos con el hecho que estos dos casos corresponden a pacientes fallecidos, se plantea una nueva hipótesis de estudio sobre la patogenicidad de estas cepas. En las muestras clínicas la especie identificada fue en su mayoría L. interrogans (n=24), seguida de L. meyeri (n=2), L. borgpetersenii (n=1) y L. kirschneri (n=1). L. Esto confirma que las variedades más frecuentemente circulantes son probablemente las más conocidas. La especie identificada en la mayoría de las muestras fue L. interrogans coincidiendo con la especie de Leptospira incluida en la vacuna VAXSPIRAL autorizada en el país. Sin embargo no se puede ignorar la circulación de otras especies como L. meyeri, L. borgpetersenii y L. kirschneri. Esto implica que independientemente de la cepa de que se trate en cada caso la vacuna disponible en el país no protegería a estos casos. Además por ejemplo no hay ningún serovar de la especie L meyeri en el panel empleado en la MAT, por lo cual debería intentarse el aislamiento de esa especie e incorporarlo al panel con el fin de aspirar a aumentar la sensibilidad de este método. Los resultados preliminares de este estudio permiten conocer las especies de leptospiras circulantes en nuestro país en los últimos años, dar un alerta sobre la inclusión de algunas de ellas en las vacunas disponibles así como en el panel del método de confirmación de los casos. En próximos estudios se profundizarán las identificaciones mediante la utilización de otras técnicas de tipificación molecular (MLVA, MLST).