Detección de deleciones y duplicaciones en el gen de la distrofina en afectados y portadoras de la enfermedad de Duchene mediante la técnica MLPA

MAMPEL A; MARZESE DM; GOMEZ L; VARGAS AL; FERREIRO V; ECHEVERRIA MI; GILIBERTO F; ROQUÉ M

Congreso; Reunión Anual de SAIC SAI SAFIS 2007; 2007

La distrofia muscular de Duchenne/Becker es una enfermedad asociada a mutaciones en el gen DMD ubicado en Xp21. Entre un 60-70% de las alteraciones corresponden a deleciones y/o duplicaciones que pueden detectarse por PCR sólo en los afectados y no en portadoras, por no ser una técnica cuantitativa. El objetivo de este trabajo fue validar y aplicar la metodología cuantitativa Multiplex Ligation Probe Amplification (MLPA) en 12 muestras de pacientes y portadoras de distrofia muscular de Duchenne/ Becker. Siete muestras de ADN con previo diagnóstico de deleciones/duplicaciones realizado por análisis de segregación de STRs fueron incluidas en este estudio. La metodología MLPA consistió en la utilización de 40 pares distintos de sondas adyacentes ligadas a cada exón del gen DMD y posteriormente amplificadas en conjunto por PCR. Los productos fueron separados por electroforesis capilar y analizados con un software especifico. En el 100% de las muestras con diagnóstico previo, MLPA confirmó los resultados. En tres de las siete muestras (un varón afectado y dos probables portadoras) el tamaño de la deleción detectada por MLPA fue idéntico al hallado por STRs y en las cuatro muestras restantes, se encontró que las deleciones abarcaban más exones. En cinco muestras sin estudios moleculares previos se diagnosticó una portadora de una deleción y un varón afectado con una duplicación. Los resultados obtenidos permitieron validar la metodología MLPA para detectar alteraciones en el número de copias de uno o más exones del gen DMD en pacientes y portadoras. Establecer el estado de portadora permitió realizar el asesoramiento genético correspondiente y al delimitar la alteración molecular se pudo analizar el marco de lectura del gen y así predecir el fenotipo Duchenne o Becker de los afectados. La metodología es sensible, especifica, rápida y su aplicación amplía las posibilidades de diagnóstico genético molecular en nuestro país.