Deteccion de portadoras de enfermedad de Duchenne: nueva estrategia diagnostica

MAMPEL A; GOMEZ L; MARZESE DM; RAMÍREZ J; VARGAS AL; ECHEVERRIA MI; ROQUÉ M

Congreso; 35º Congreso Argentino de Genética; 2006

La distrofia muscular de Duchene (DMD) una enfermedad ligada al cromosoma X que afecta la marcha, y en periodos avanzados la función respiratoria y cardíaca. Se sabe que alrededor del 60% de los casos son consecuencia de deleciones e inserciones en el gen que codifica para la distrofina. Las técnicas de PCR y secuenciación de exones individuales al no ser cuantitativas no pueden aplicarse para detectar portadoras ya que estas quedan enmascaradas por el alelo sano. El método Multiplex Ligation Probe Amplification (MLPA), no disponible hasta hace poco en nuestro medio, es una nueva estrategia de cuantificación relativa que permite detectar deleciones o duplicaciones en 40 secuencias de ADN simultáneamente. El objetivo de este trabajo fue poner a punto esta metodología para detectar portadoras de deleciones en el gen DMD. Se partio de 100ng de ADN que fueron hibridados con 40 pares de sondas adyacentes, ligadas y amplificadas en conjunto por PCR. Los productos fueron separados por electroforesis capilar en un ABI3130 y analizados en sofware GeneMarker. El análisis cuantitivo de los 79 exones del gen DMD permitió detectar portadoras de deleciones en exones consecutivos, algunos de ellos confirmados por PCR en sus hijos afectados.El desarrollo de esta nueva metodología permitió detectar portadoras de deleción.