Detección de una mutación sin sentido en una familia argentina con HNPCC por MLPA

LAURA C. GOMEZ; DIEGO M. MARZESE; JOSE´ ADI; DIEGO BERTANI; JORGE IBARRA; BART MOL; IVONNE JOHANNA VOS; GABRIELA DE MARCHI; MARÍA ROQUÉ

mENDOZA

Jornada; XXI Jornadas de Investigacion de la SECTyP de la UNCuyo; 2008

La detección de mutaciones en genes relacionados con cáncer colorrectal hereditario permite aplicar estrategias de prevención. Las formas más utilizadas para el diagnostico genético son el DGGE, SSCP y la secuenciación directa. Sin embargo, deleciones o duplicaciones no pueden ser detectadas por metodologías basadas en PCR debido a la naturaleza no cuantitativa de estas técnicas. Nuestro objetivo fue aplicar una estrategia cuantitativa (MLPA) para la detección de deleciones en los genes apc, mlh1 y msh2. El ADN de 17 pacientes con cáncer de colon ha sido analizado a la fecha. En breve, 40 sondas distintas fueron hibridadas con el ADN, ligadas, y amplificadas en conjunto por PCR. Posteriormente, los productos fueron separados por electroforesis capilar en un secuenciador automático. En uno de los pacientes con cáncer colorrectal se detectó una alteración en el exon 19 del gen mlh1. La alteración detectada sin embargo no es una deleción ni duplicación. En este caso, la aplicación de la metodología MLPA permitió detectar una mutación sin sentido que afecta la zona de hibridación de la sonda de MLPA. A partir de este resultado se diseño una estrategia de PCR/RFLP para detectar el cambio en el resto de la familia. Los resultados obtenidos permiten proyectar la aplicación de un nuevo método de diagnostico genético para familias afectadas y aportar de esta manera a la prevención de la enfermedad.