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1-Desarrollar anticuerpos VHH de camélidos sudamericanos frente antigenos virales y proteínas celulares. 2-Proveer a la contraparte Europea (EMBL) la oportunidad para inmunizar llamas para generar bibliotecas de genes de Ac VHH contra proteinas de su interés. 3- Utilizar los anticuerpos VHH obtenidos: a- Como reactivos, de alta pureza y calidad, en técnicas inmunológicas de uso común en el laboratorio (ELISA, Western Blot,etc). (INTA) b- Para desarrollar técnicas inmunológicas con formato "Strip Test" aplicadas a la detección de agentes virales (INTA). c- Para ser utilizados como fuente de inmunidad pasiva frente a infecciones virales (INTA) d- Para ser utilizados coo herramientas para realizar estudios de ciencia básica en sistemas in vitro enfocados al estudios de las propiedades biosfísicas de proteínas cito esqueléticas relacionadas con el proceso de mitosis celular (EMBL) A través de este proyecto se pretende incoporar a nuestro laboratorio la tecnologia del desarrollo de Ac VHH de camelidos sudamericanos, frente a antigenos proteicos (ya sea contra proteinas celulares o antigenos virales). Mediante la tecnologia citada se espera poder obtener anticuerpos de alta calidad en forma de productos recombinantes (moleculas simples de alta afinidad y avidez contra la proteina específica). Esta metodología permitirá producir los Ac en altos niveles de expresión y luego purificarlos. Los productos a desarrollar a partir de estos reactivos tienen gran aplicacion practica y académica. Por otro lado, el desarrollo de esta linea de investigación resulta de gran interes estrategico para el laboratorio ya que nos posicionaría en un tema novedoso y de alta aplicacion tecnológica, que utiliza recursos autóctonos propios de la region. Este proyecto, además, pretende iniciar una colaboración internacional entre nuestro Instituto y un Instituto de Investigación Europeo de alta calidad. Los Ac obtenidos serán utilizados, según se indicó en el objetivo del vinculo, como reactivos en técnicas inmulógicas para la deteccion de agentes virales o como reactivos aplicados al estudio de la funcion celular. En resumen los esperados de este vinculo son: 1- Establecer un estrecho intercambio académico y tecnologico con un grupo Europeo de Investigación 2- Desarrollar productos biotecnológicos de amplia aplicación basica y práctica Para realizar este proyecto se establecerá una colaboración con el grupo de trabajo del Dr Surrey del European Molecular Biology Laboratory, Alemania. El Dr Surrey es experto en el estudio de aspectos bioquimicos y biofisicos de las proteinas citoesqueleticas relacionadas con el proceso de mitosis y trabaja en el desarrollo de biosensores. El equipo del Dr Surrey ha comenzado recientemente a desarrollar bibliotecas de genes de Ac VHH contra proteinas celulares, con el fin de utilizarlos en experimentos en el campo de la biologia y biofisica celular. Estos Ac presentan varias ventajas respecto de los Ac convencionales: se pueden expresar en niveles elevados como proteinas recombinantes en bacterias y levaduras, se pueden purificar, se seleccionan a partir de bibliotecas de genes relativamente pequeñas, presentan niveles de afinidad y avidez optimas y resiten altas temperaturas (son funcionales a 90ºC) y condiciones extremas de pH y fuerza ionica. Dado su necesidad de trabajar con camelidos sudamericanos, el Dr Surrey manifestó su interés de trabajar con un laboratorio sudamericano, de renombre, capaz de realizar experiencias con llamas. Nuestro grupo de investigación cuenta amplia experiencia en el trabajo con animales, incluidos los camélidos sudamericanos, y experiencia en el desarrollo de técnicas inmunológicas. Esta colaboración le aportará al Dr Surrey y su equipo la posibilidad de realizar sus experimentos para desarrollar Ac VHH frente a proteinas citoesqueleticas, en llamas. Por su parte, el Instituto de Virologia de INTA tendrá la posibilidad de incorporar la tecnología del desarrollo de Ac VHH frente a antigenos virales. Estos reactivos resultan de gran interés para nuestro grupo de trabajo, ya que se espera que los Ac generados puedan ser aplicados a mejorar las técnicas inmunológicas ya existentes y a desarrollar nuevas herramientas necesarias o aplicables a todas nuestras líneas de trabajo. Ambas partes se beneficiaran entonces de estandarizar la tecnologia de desarrollar Ac VHH. Para realizar este proyecto se adquirirán llamas que serán mantenidas en el predio de INTA Castelar. Cada llama será inmunizada con un antigeno virales o una proteína celular, altamente purificados. Inicialmente se trabajará con dos proteínas de interés para el grupo Alemán y dos proteínas de interés para nosotros. El en caso del Dr Surrey, utilizará 2 motores moleculares involucrados en la mitosis celular. En nuestro caso, se utilizarán la proteína de cápside interna de rotavirus (VP6) y la glicoproteína neutralizante del virus de la Diarrea Viral Bovina (E2). Luego de un estricto protocolo de inmunización, se extraerán linfocitos de las llamas inmunizadas, y a partir de estas células se desarrollará una biblioteca de genes de Anticuerpos VHH, mediante la técnica de display de fagos. Una vez obtenida la esta biblioteca se realizará un bio-paneo para seleccionar Ac dirigidos contra cada una de las proteínas de interés. Como se desprende de lo antes citado, la justificación de este vínculo es realizar un proyecto entre nuestro grupo de trabajo y el grupo alemán para el intercambio de tecnología y reactivos producidos en colaboración y para la realización de trabajos científicos que se traduzcan en publicaciones internacionales de primer nivel. Generar tecnología o nuevos conocimientosEn este proyecto se pretende incorporar en nuestro instituto la tecnología necesaria para generar anticuerpos monoclonales recombinantes de alta calidad. El vínculo con un Instituto Europeo como el European Molecular Biology Institute resultará altamente beneficioso para el INTA en cuanto al intercambio académico (formación de recursos humanos, aporte de tecnología, transferencia de reactivos y productos, publicaciones, etc) Para la contraparte Europea, el hecho de disponer de llamas para la generación de bibliotecas de genes VHH resultad de gran interés dado que el uso de estos reactivos abre nuevas lineas de investigación dentro del estudio basico de los motores mitoticos.Transferir una tecnología desarrollada por INTALa realización de esta colaboración permitirá la provisión a la contraparte Europea de material inicial (linfocitos de sangre de llama) para la generacion de las bibliotecas génicas que derivarán en la producción de Ac VHH. Este hecho resulta importante ya que se esta dando utilidad tecnológica a un recurso autóctonos de nuestro país (llamas). Esto posiciona muy favorablemente a nuestra institución a nivel regional como proveedora de materias primas para el desarrollo de reactivos especiales hacia el ambito académico internacional. Una vez estandarizada la tecnologia, el INTA se beneficiará a partir de la utilización de estos Ac en el desarrollo de kits diagnósticos comerciables, reactivos conjugados, suplementos inmunes, etc. que serán transferibles al ámbito nacional y regional. La contraparte Europea se benficiará, como se explico anteiormente, a nivel academico. Obtener beneficios económicos para INTADado que los reactivos desarrolados, luego serán utilizados, entre otras cosas, en el desarrollo de kits rápidos de diagnostico virológico y suplementos inmunes, esto puede resultar en beneficios directos para el INTA. Los kits rápidos de detección de Ag virales son actualmente muy requeridos por el mercado regional, y como en el caso de rotavirus, resultan de gran aplicación tanto en el ámbito veterinario como en salud pública. Por otro lado, dado que estos anticuerpos resisten un poceso de pasteurización también pueden ser utilizados como estrategias de inmunidad pasiva tanto para animales como para humanos. Ambas propuestas pueden derivar en el desarrollo de productos comercializables y transferibles al mercado que nos permitirán mantener el liderazgo de este tipo de acciones dentro de la región Desarrollar o incrementar las capacidades institucionalesLa realización de este proyecto incrementara las capacidades institucionales en cuanto a la formación de recursos humanos, aporte de tecnología, intercambio académico y elaboración de publicaciones de primer nivel. Además, se mejorará la infraestructura edilicia para poder alojar las llamas, ya que se condicionará especialmente un potrero para tal fin. OtrosEn el caso de que esto se traduzca en tecnologia apropiable y transferible el inta obtendra beneficios economicos directos.

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